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通管方对SOI模型大鼠输卵管组织fasl、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达的中医影响

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  • 论文编号:el201805102232388633
  • 日期:2018-04-27
  • 来源:上海论文网
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本文是一篇中医论文,中医承载着中国古代人民同疾病作斗争的经验和理论知识,是在古代朴素的唯物论和自发的辨证法思想指导下,通过长期医疗实践逐步形成并发展成的医学理论体系。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇中医论文,供大家参考。
 
引言
 
不孕症是指男女双方同住1年以上,性生活规则,没有避孕而未孕者[1]。我国不孕症发病率为7%10%[2],其中女方因素约占40%。近年来随着雾霾等自然环境的改变,输卵管炎、子宫内膜炎、卵巢囊肿、子宫内膜异位症、盆腔炎性疾病等妇科疾病增加,人工流产术等妇科手术无菌操作的不规范性,不孕症发病率呈现逐年上升趋势,已成为威胁女性工作、生活及家庭的“隐形杀手”。目前在各种导致不孕症的因素中,输卵管性因素约占女性不孕症一半的比例[3]。输卵管炎性阻塞性不孕(SalpingitcObstructiveInfertility,SOI)是由于各种体内外因素的影响而引发了输卵管发炎,长期以往的慢性炎症浸润及向上蔓延,使输卵管某些部位发生阻塞或部分欠通畅,进而导致的不孕症。常常由于女性生殖器的上行性感染或者其它原因造成的腹膜腔发炎,或者各种人为因素及内外环境的影响,而引起输卵管形态发生异常改变,致使其不能正常拾卵,运送精子,甚至干扰精卵结合,以致无法正常将受精卵送达至宫腔。而炎症就是导致输卵管发生病变最常见的原因之一,炎症使输卵管出现不同程度的增粗、扭曲、肥大、积液等,成为了女性继发不孕最重要的单一因素。患病妇女的身心健康及家庭受到了巨大冲击,同时经济上的负担加重也成为了此病造成的不可逆的严重恶果[4]。现代医学中,治疗SOI常见方法无外乎包括手术治疗、输卵管插管通液术、介入治疗、药物治疗等,这些治疗方式可以在一定程度上缓解患者疾病带来的痛苦,但也存在费用高、受孕率低等局限性,同时治疗后可再次出现输卵管积水、积脓、粘连、扩张等,故临床疗效及预后不确切。与此同时,中医药治疗SOI的优势是无可取代的,中医辨证SOI的主要病机是“血瘀”,故临床治疗上多用活血化瘀的药物。现代药理研究显示,多种中药均能改善炎症局部环境,抑制炎细胞浸润及增生,发挥抗炎免疫作用,加速恢复输卵管的形态结构及功能,使与周围组织的粘连得到松解,使输卵管积水、增粗、肿胀、扭曲等问题得到改善,修复炎症损伤及病变组织[5],这些研究均能为中医药治疗SOI供给相应的药理方面的理论依据。近年来不乏关于中医药治疗该病的临床研究,基于前期研究及确切的临床疗效,由此可见,积极开展中医药治疗输卵管炎性阻塞性不孕是十分必要的。
历经多年的临床疗效观察发现,通管方作为经验用方,匡继林教授[6]给输卵管阻塞性继发性不孕症的60位患者口服通管方,再配合保留灌肠、中药外敷等疗法,根据个体化方案接连治疗3个疗程,反馈出的效果满意。但目前大多数研究仅局限于临床疗效观察,其作用机制尚不十分明确,伴随着目前抗生素的滥用,致使患者耐药性增加,手术治疗对该病有一定的局限,存在预后无法估计等问题,均使该方尚有一定研究价值,因此有必要对其深入进行系统研究,以及临床上的进一步推广。本研究通过建立SOI大鼠模型,采取免疫组化方法检测受试大鼠输卵管组织中Fasl、Caspase-8及Caspase-3蛋白的表达,研究和探讨通管方的可能作用机制,并给SOI的临床治疗方面提供可靠的实验依据,为日后研发治疗本病的相关药物奠定基础,积极开展并推广中医药治疗SOI。
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第一部分实验材料与方法
 
1.实验地点
湖南中医药大学SPF级实验室
 
2.实验材料
 
2.1实验动物
选用健康SPF级未孕SD雌性大鼠82只,体质量为212.84±20.16g,鼠龄为8~12周。以上动物均由湖南中医药大学实验动物中心供给。证书编号:SYXK(湘)2013-0005。饲养条件:将大鼠置于湖南中医药大学SPF级实验室饲养房,随机分为14组,每笼即为一组,其中13笼每笼6只,剩下一笼4只大鼠,保持室温在22至26摄氏度之间,保持相对湿度30-70%,使实验室空气流通,保持环境干燥,不潮湿,噪音不超过60dB。采用全价营养颗粒饲料,给大鼠提供清洁用水,定期清洁消毒所有器具。
 
2.2实验药物
 
2.2.1通管方:穿山甲7g、穿破石20g、当归10g、丹参10g、芜蔚子10g、三七5g、香附10g、赤芍10g、路路通10g、王不留行10g、薤白10g、乳香10g、没药10g、泽兰10g、党参15g、白术15g、甘草5g。以上所有优质药材,均由湖南中医药大学第二附属医院中药房提供。
2.2.2妇炎康软胶囊:0.5g/粒,36粒/盒。由深圳市佳泰药业股份有限公司提供,批准文号:国药准字Z20050571。药液配置:拆开胶囊,取胶囊内红褐色药物粉末,用灭菌蒸馏水配置成混悬液(每1ml含生药量0.81g)灌胃给药。
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3.通管方对SOI模型大鼠输卵管组织中相关细胞凋亡因子蛋白表达的影响
 
3.1输卵管组织中Fasl蛋白的表达情况
实验表明,与空白组比较,假手术组无统计学意义(P=0.827>0.05),模型组有统计学意义(P<0.05),提示模型复制成功。药物干预治疗后,与模型组相比,妇炎康软胶囊组有统计学意义(P<0.05),通管方各剂量组有高度统计学意义(P<0.01),提示妇炎康软胶囊组、通管方低、中、高剂量组均有不同程度的治疗效果;治疗后,两组之间进行比较,与妇炎康软胶囊组相比,通管方低剂量组无统计学意义(P>0.05),提示两组间治疗效果无明显差异。结果见表7。实验表明,与空白组比较,假手术组无统计学意义(P=0.308>0.05),模型组有统计学意义(P<0.01),提示模型复制成功。药物干预治疗后,与模型组相比,妇炎康软胶囊组有高度统计学意义(P<0.01),通管方各剂量组有高度统计学意义(P<0.01),提示妇炎康软胶囊组、通管方低、中、高剂量组均有满意的治疗效果;治疗后,两组之间进行比较,与妇炎康软胶囊组相比,通管方低剂量组无统计学意义(P>0.05),提示两组间治疗效果无明显差异,其中以通管方高剂量组的效果最为明显。
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第三部分讨论........12
1.混合菌诱导SOI大鼠模型的建立......12
2.现代医学对SOI的认识..........13
3.祖国医学对SOI的认识..........15
4.通管方的研究进展.......16
4.1通管方的组方依据及用药分析..........16
4.2通管方组方药物现代药理研究..........17
4.3通管方治疗输卵管阻塞性不孕作用机理研究..........20
5.通管方对输卵管炎性阻塞性不孕的可能作用机制............20
5.1通管方对SOI模型大鼠输卵管形态学的影响.........20
5.2通管方对SOI模型大鼠输卵管组织Fasl、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达的影响............21
 
第三部分讨论
 
1.混合菌诱导SOI大鼠模型的建立
目前,不孕症已逐渐进入了人们生活中,引起了社会各方面的重视。受雾霾等自然环境的影响,食品安全等社会问题的日益突出,长期熬夜、工作生活压力大、情绪不稳定等现代人生活方式的悄然改变,人工流产等频繁的宫腔操作使宫腔感染几率的不断增加,均使不孕症的发病率呈现逐年增长趋势。其中,因输卵管因素造成的不孕症已成为难题中的难题。不必要的妇科检查、不规则的妇科手术操作、不注意经期卫生、支原体等病原体感染,多种因素作用均使阴道、子宫上行性感染的几率增加。而宫腔内长期的慢性炎症浸润,致使输卵管逐渐发炎,引起了输卵管形态及病理组织发生了变化,例如输卵管外观增粗、扩张,走形扭曲、上举,向两侧过度牵拉,管腔某部分堵塞,伞端积水或积脓,与卵巢、盆壁粘连等等。当前,关于人类输卵管炎性相关疾病的研究已经进入到更深层次,建成符合人类SOI发病机理的动物模型,通过对动物模型进行实验研究,是弄清SOI的发病机制以及治疗本病的前提。影响建立动物感染模型的因素很多,研究目的的差异性导致选择的病原微生物有所不同,例如接种的菌量及浓度,决定感染动物的细菌量,菌量过少或浓度过低达不到实验预期效果,菌量过多或浓度过高则易导致动物死亡,而注射剂量等也对造模成功有一定的影响,注射剂过大或过少均影响实验效果。近年来,小鼠、大鼠[15]、兔[16]及猴[17]等成为了国内外最常用的实验动物。猴感染模型最接近人类,但在资源、费用上面存在局限性,向市面推广有一定的困难;小鼠、大鼠、兔价格合适,资源相对丰富,在动物实验研究方面占据一定优势,国外不乏有采取接种病原微生物的方法制作输卵管炎性不孕大鼠模型的报道。从致炎剂选择来看,选择制作SOI动物模型的致炎剂,目前有两种方式被采用的频率最高,分别是化学法和生物法,其中输卵管绝育术[18]被借鉴的最多。在生物法的选择上,目前主要是通过造成一种化学性烧伤而致炎,致使输卵管充血、粘连、积水、肿胀及渗出等,当前大多数学者均采取注射“苯酚胶浆剂”进入输卵管;化学法方面,目前则大多数研究者选择采用混合菌、支原体、衣原体等病原微生物制备输卵管炎性动物模型,马宝璋等[19]采用大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌制备出混合菌液,再将混合菌液注入大鼠子宫建立炎症模型,表明了目前国内大多数学者选择致炎剂的趋势所在。从感染途径来分析,化学性致炎与生物性的致炎机制不相同,有较大的差异。李玲[21]用苯酚胶浆剂注入家兔双侧输卵管,制作家兔输卵管化学性致炎动物模型,结果虽然有慢性炎症的一些表现,但仍考虑最终采用病原微生物制备输卵管炎性不孕大鼠模型,此方式不但更能接近临床病理的真实情况,而且从制作过程来看,方法更容易掌握,易复制,重复率及成功率高。当前大多数学者采用多种多样的观察方式,首选肉眼观察进行输卵管造模前后、灌药治疗前后的对比,观察其组织形态有无改变。其次,可以利用光镜、电镜等科技手段进行更为细致的观察,分不同阶段进行对比分析,判断SOI大鼠模型造模成功与否。由此可见,生物法在某种程度上更接近人类致炎机制,比化学法更具说服力。从致病因素来分析,临床上导致人类生殖道感染的病原体多种多样,如支原体、衣原体、细菌等[19],SOI的致病微生物相当复杂,较多的是由解脲脲原体、葡萄球菌及大肠杆菌等混合性病原体致炎。因此目前把解脲脲原体、葡萄球菌、大肠杆菌按一定比例跟浓度制作出混合菌液,用此混合菌液制备SOI模型更符合临床实际情况。据报道,赵广兴等[20]等采取混合溶血性链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌液的方法建立SOI大鼠模型,造模后通过观察大鼠输卵管病变情况,证实SOI大鼠模型的造模成功,也发现了输卵管慢性炎症的表现,出现了积水、增粗及扭曲等病理学改变。从费用上分析,大鼠对致病菌相对比较敏感,实验和观察周期较长,更能适应环境,有强大的环境适应能力,更为经济实惠。在造模过程中,要控制混合菌的菌种量跟浓度,还要注意无菌操作原则,减少大鼠的死亡率,提高造模的成功率。综上,本实验制作SOI大鼠模型采用混合菌接种法,根据其组织及病理形态变化判断造模是否成功,本方法经实践证明也切实有效。#p#分页标题#e#
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结论
 
通管方能减轻大鼠输卵管积水、增粗、扭曲、肿胀等,分离与周围组织粘连,减少炎性细胞浸润,促进病变组织增生修复,使输卵管恢复正常形态。本实验研究采用混合菌接种法建立SOI大鼠病理模型,通过研究通管方对SOI大鼠模型输卵管组织中细胞凋亡因子Fasl、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达的影响,以探讨其可能作用机制。实验结果初步表明:
1.利用混合菌接种法可成功建立SOI大鼠模型。
2.通管方能改善SOI大鼠模型输卵管结构与功能,且以通管方高剂量组疗效最佳。
3.通管方通过促进FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白的表达,加速炎细胞凋亡,使慢性炎症得以吸收消散,发挥抗炎免疫作用,可能是其发挥疗效的作用机制之一,也为日后研发治疗SOI的中药新药奠定基础。
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参考文献(略)
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