本文是一篇中医论文，笔者认为在烧伤创面愈合中，Notch信号通路被阻滞能够减弱创面血管生成中VEGF、VEGFR-2的表达，降低创面动态愈合率，提示Notch信号通路可能通过干预烧伤创面愈合中血管激活因子的表达从而影响烧伤创面的愈合。
引言
烧伤一般是指因热力等因素所导致的皮肤组织损伤，是外科比较常见的意外性伤害，其发病率呈上升趋势。美国烧伤协会2011年的统计数据显示，全美约45万人因烧伤而需要救治，比1995年增加了340%[1]。古代中医文献将烧伤称之为水火烫伤，认为其发病机制为热毒侵害人体，不仅有热而且有毒，导致皮肉、甚至脏腑腐烂，病情轻者仅可见皮肉损伤，重者则可因火毒炽盛，耗伤津液，损伤阴气，导致气阴两伤；或可因火毒入血，内攻脏腑，导致脏腑失和，阴阳失调，甚至死亡，故中医在治疗烧伤上主张以清热解毒为主。创面愈合是一个非常复杂的过程，包括炎症反应、血管生成、胶原沉积、再上皮化、组织重塑等。其中血管生成是创面愈合的关键环节之一，血管生成的好坏直接影响创面愈合的速度。研究已经证实，Notch信号通路在血管生成、内皮细胞的增殖分化以及肿瘤发生发展的过程中具有重要作用[2]。而关于Notch信号通路与烧伤创面愈合中血管生成的相关性研究，文献报道尚不多见。而煨脓生肌法是中医治疗烧伤的特色疗法，现代实验研究证实，煨脓生肌的作用机理主要有：增强创面的抗感染能力；促进局部微循环，促进创面血管再生；促进创面细胞增殖分化[3]。矾冰纳米乳（系以白矾和冰片为主，运用纳米乳为载体，油相载冰片、水相载白矾，制备而成的一种外用中药复合纳米乳）则是以煨脓生肌法立方治疗烧伤的有效药物。经前期研究也已经证实，矾冰纳米乳在治疗烧伤创面愈合中具有确切的疗效，能够促进EGF在创面修复的早期表达，缩短创面愈合时间，加速创面愈合[4-5]。
导师根据多年研究及临床经验认为：一方面，Notch信号通路在抗肿瘤药物研发、心脑血管疾病缺血后的血管新生、组织修复等都被广泛应用，而Notch信号通路与烧伤创面愈合中血管生成的相关性尚未明确，因此研究两者之间的相关性对于进一步治疗烧伤具有重要的意义；另一方面，矾冰纳米乳能够较好的促进烧伤创面的愈合，但其具体的作用机制尚未清楚，因此可以在深入研究Notch信号通路与血管生成相关性的基础上，把矾冰纳米乳与Notch信号通路联合起来，通过其对Notch信号通路的干预，初步阐明矾冰纳米乳治疗烧伤的具体作用靶点及其途径，明确其治疗烧伤的分子机制，以便更好的发挥中医中药促进血管生成的优势。故本课题运用动物实验来研究Notch信号通路与烧伤创面愈合中血管生成的相关性以及运用矾冰纳米乳处理烧伤创面，通过Western-blot检测其Notch信号通路中配体的表达水平，以达到初步明确其促进烧伤创面愈合的部分机制。
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第一部分实验研究（Notch信号通路与烧伤创面愈合中血管生成的相关性）
1实验方法
于实验前1天用8%硫化钠将兔背部脊柱两侧面积约为13×13cm2（10%TBSA）的范围脱毛，脱毛干净后用清水将8%硫化钠擦净，涂以凡士林，以免损伤皮肤。在实验当天将兔子称量体重后，确定脱毛部位无红肿和破损等异常情况后，再用戊巴比妥钠（30mg/kg）耳缘静脉注射麻醉，麻醉起效后，用插有温度计的直径为5cm的圆柱铁筒水浴加热至98℃，将铁筒底部擦净后，利用烫伤装置的自重将底部放置在脱毛区域持续烫18秒，造成深II度烧伤创面（经病理切片证实，如图1所示），创面络合碘消毒后，予纱布绷带包扎，带上防咬罩（防止兔子将绷带咬断），分笼饲养，自由进食饮水。
将120只健康的新西兰大白兔随机分为3组：阻滞剂组、模型组、正常对照组，每组40只，雌雄兼备，阻滞剂组于造模即烫伤前一天按2mg/kg耳缘静脉注射DAPT，模型组耳缘静脉注射等量的生理盐水，造模以后每天1次，持续至14d，生理盐水组不予造模，注射等量的生理盐水,每天1次，连续至14天。
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2皮肤组织免疫组化步骤
（1）脱蜡，水化组织切片。（2）依据所应用一抗的特殊要求对组织切片进行预处理。（3）将3%H2O2去离子水孵育10分钟用来阻断内源性过氧化物酶。（4）PBS或TBS冲洗2分钟×3次。（5）滴入一抗，室温或37℃孵育1~2小时或者4℃过夜，PBS或TBS冲洗，2分钟×3次。（6）滴加试剂1：PolymerHelper（即用型），室温或37℃孵育20分钟，PBS或TBS冲洗，2分钟×3次。（7）滴加试剂2：polyperoxidase-anti-mouse/rabbitIgG（即用型），室温或37℃孵育20~30分钟，PBS或TBS冲洗，2分钟×3次。（8）应用DAB溶液显色。（9）用自来水尽可能冲洗、复染、脱水、透明、封片。（10）显微镜下观察，摄取图像。
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第三部分讨论....18
1中医对烧伤的认识与发展.........18
2现代医学对烧伤的认识与发展.......18
3Notch信号通路与血管生成....19
3.1Notch信号通路的组成及信号传导..........19
3.2血管生成.......19
3.3Notch信号通路与血管生成的关系..........20
4矾冰纳米乳对Notch配体表达的影响........21
第四部分结论....23
第三部分讨论
1中医对烧伤的认识与发展
祖国医学对烧伤早有记载，最早是在《武威汉代医简》中称为“汤火冻”。在治疗方面经过几千年来的研究，积累了丰富的经验，从早期的晋代、唐代的医学名家如葛洪、孙思邈等就提出了烧伤的主要病因是火热毒邪所致，常用栀子、黄芩、白敛等清热药去除热毒。之后明代医家根据烧伤时期跟程度的不同而辩证施治，再到清代医家陈世铎，他在《洞天奥旨》中指出“汤烫疮……轻则害在皮肤，重则害在肌肉，尤甚者害在脏腑，故治火烧之症，必须内外同治，则火毒易解也”，由此可知，古代医家在治疗烧烫伤方面有着非常丰富的临床认识以及详细的治疗法则。其中运用中医药制剂在烧伤的外用治疗方面也有一定的发展。早在《黄帝内经》（素问）“痈疽篇”内就已有“疏砭之，涂以豕膏”的记载。晋代葛洪《肘后方》中亦有记载“用年久石灰敷之或加油调”，开始用散剂、油膏剂治疗烧烫伤。
2现代医学对烧伤的认识与发展
现代医学认为烧伤是由热液、火焰、炽热金属、蒸气、化学物质、放射线、微波等导致的组织损伤，其中主要是皮肤损伤，严重者可伤及皮下组织、肌肉骨骼、关节、神经血管甚至脏腑等。目前使用较多的是抗生素类药物，从早期的青霉素到头孢类抗生素。但近年抗生素使用泛滥，使得感染的病菌不断改变，加之不同地区用药不同，对药物敏感度不同，所以联合用药治疗取得了较好的效果，如他氟哌酸银联合氧化锌治疗。自“创面脓毒症”的概念被提出以来，西医方面也加强了对局部外用药物应用的重视，如使用最广的磺胺嘧啶银，对控制感染具有显著效果。而外用药物的改进，各种新型敷料的应用，如DuoDerm、水凝胶敷料等，均有利于烧伤创面的愈合。另一方面皮肤原位再生医疗技术（由湿润暴露疗法和美宝湿润烧伤膏组成）也已成为一项比较成熟且应用广泛的临床烧伤治疗技术体系，是当代外治烧伤的中医方法之一。
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结论
1、在烧伤创面愈合中，Notch信号通路被阻滞能够减弱创面血管生成中VEGF、VEGFR-2的表达，降低创面动态愈合率，提示Notch信号通路可能通过干预烧伤创面愈合中血管激活因子的表达从而影响烧伤创面的愈合。
2、不同剂量的矾冰纳米乳均能够上调Notch配体Jagged1、Jagged2、Dll-1、Dll-3的表达以及下调Dll-4的表达，其中以中剂量组的表达变化最明显，差异具有统计学意义（P<0.05），提示矾冰纳米乳促进烧伤创面愈合的作用机制可能与其上调Notch配体Jagged1、Jagged2、Dll-1、Dll-3的表达以及下调Dll-4的表达有关。
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参考文献（略）
