中医论文哪里有？本文探讨了川芎嗪对 H2O2诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用。采用了 CCK-8 法、GFAP 染色、流式细胞术以及检测 LDH 含量和 SOD 活性观察不同浓度的川芎嗪对 H2O2诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用，并进一步通过RT-qPCR 法和 Western blot 法探讨与凋亡蛋白以及与 PI3K、AKT 相关蛋白的影响。
第一部分： TMP 对 H2O2所致的大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用
1.实验动物及试剂设备
1.1 实验动物
SPF 级新生 24～48 h 大鼠，购自第三军医大学大坪医院实验动物中心，动物生产许可证号 SCXK(渝)2012-0005。所有操作按照《医学实验动物管理实施细则》要求，符合动物福利与伦理原则。
根据文献及前期预实验设立空白对照组（正常培养基）、模型组（100μmol/L作用 24h）、TMP 剂量组(25、50、100μmol/L TMP 预处理 48 h 后，加入 H2O2作用 24 h)。用处于对数生长期的星形胶质细胞用于实验。
（1）使用 75%酒精对超净台表面以及需要用到的试剂表面进行消毒，然后打开超净台和细胞房的紫外线照射 30min 以上，以确保在一个无菌的环境里操作。
（2）用 1%L-多聚赖氨酸包被所需培养皿，放入培养箱 2h，然后用 PBS 洗涤两遍，放入超净台晾干备用。
（3）取 24-48h 内的 SD 新生鼠，浸泡体积分数为 75%的乙醇溶液麻醉 5min。
（4）准备两个 10cm 培养皿倒入预冷 PBS 和两个 6cm 培养皿倒入预冷 DMEM 培养液。
（5）在无菌的条件下用剪刀将大鼠从颈部将头剪下，在预冷的 PBS 中漂洗一次。
（6）将头皮和头骨剪开，把全脑仔细分离出，在预冷的 PBS 中漂洗一次。
3 结果
3.1 TMP 预处理对各组星形胶质细胞 PI3K、AKT、Bcl-2、Bax 和Caspase-3 mRNA 表达的影响
与空白对照组比较，模型组 PI3K、AKT 和 Bcl-2 mRNA 表达下调（P<0.05）；与模型组比较，TMP 低、中、高剂量组 PI3K、AKT 和 Bcl-2 mRNA 表达上调（P<0.05）。与空白对照组比较，模型组 Bax、Caspase-3 mRNA 表达上调（P<0.05）；与模型组比较，TMP 低、中、高剂量组 Bax、Caspase-3 mRNA 表达下调（P<0.05）,见图 1。
3.2 TMP 预处理对各组星形胶质细胞 PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白表达的影响
与空白对照组比较，模型组PI3K、p-AKT和Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，TMP 低、中、高剂量组可上调 PI3K、p-AKT 和 Bcl-2 的蛋白表达，其中中剂量组最为明显（P<0.05）。与空白对照组比较，模型组 Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高（P<0.05）；与模型组比较，TMP 低、中、高剂量组 Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05），见图 2。
4 讨论
细胞的凋亡是一个多环节、多因素决定的复杂过程，可能通过激活或抑制多条信号通路并与调控凋亡蛋白家族的表达有关[25]。Bcl-2 蛋白家族为细胞凋亡的主要调节因子，在维持细胞存活方面起关键作用[26]。其中重要成员有 Bcl-2 和Bax 蛋白等，分别为抗凋亡和促凋亡蛋白，而 Caspase-3 是 Bcl-2 家族通过线粒体途径进行调控的下游促凋亡蛋白[27]。Bcl-2 是重要的抑制细胞死亡的基因，可以抑制多种刺激和损伤导致的细胞死亡和细胞生存；Bax 过量表达时就会跨越线粒体，形成同源二聚体时会促进细胞的凋亡[28]。细胞接受凋亡信号时，Bax 蛋白表达增高，Bcl-2 却降低，造成线粒体跨膜电位下降，可进一步激活 Caspase 家族[29]。而 Caspase-3 是 Caspase 级联反应的凋亡执行因子，也是细胞凋亡的关键酶之一，可直接介导细胞的凋亡[30]。被认为是鉴定细胞是否正在经历凋亡的生物标志物，因此检测 Caspase-3 的表达水平也是对于细胞凋亡检测项目的关键一项。本研究通过 Real-time PCR 与 Western blot 协同探讨了 TMP 保护作用与调控凋亡家族蛋白的联系，发现适宜浓度 TMP 预处理后，细胞中 Bcl-2 的 mRNA 与蛋白表达显著上升，Caspaase-3、Bax 的 mRNA 与蛋白表达显著降低。PI3K/AKT 信号通路是体内重要的细胞信号传导途径并且介导广泛的细胞功能，例如存活、增殖、迁移和凋亡[31]。PI3K 是一类重要的脂质激酶，能特异性催化脂酰肌醇脂质，促进 AKT 蛋白的磷酸化，而磷酸化的 AKT 蛋白在通路的中游位置，可以进一步影响下游凋亡家族蛋白的表达，从而影响细胞的凋亡，决定细胞的命运[32]。
全文总结
本文探讨了川芎嗪对 H2O2诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用。采用了 CCK-8 法、GFAP 染色、流式细胞术以及检测 LDH 含量和 SOD 活性观察不同浓度的川芎嗪对 H2O2诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用，并进一步通过RT-qPCR 法和 Western blot 法探讨与凋亡蛋白以及与 PI3K、AKT 相关蛋白的影响。结果发现：
1、与空白对照组比较，模型组的凋亡率以及 LDH 含量升高、SOD 活力减少；与模型组比较，川芎嗪剂量组存活率明显升高，SOD 活力升高，LDH 含量减少。证明川芎嗪对过氧化氢诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤有保护作用。
2、川芎嗪对星形胶质细胞的保护作用可能是通过调控凋亡蛋白 Bcl-2、Bax、Caspase-3 以及 PI3K、AKT 通路的相关蛋白有关。
参考文献（略）
