本课题建立了助阳开郁颗粒的制备工艺部分，以挥发油得量为评价指标，对对挥发油的提取工艺进行优化；以挥发油包合率为指标，对挥发油的包合工艺进行优化；总生物碱的含量为指标，对方中提取工艺进行优化；以成形率、溶化性、吸湿性为指标，分别对喷雾干燥、辅料的种类以及干法制粒的工艺进行研究。也对助阳开郁颗粒质量标准进行初步的探究，采用薄层色谱法，对处方中炙甘草、黄柏、桂枝、砂仁进行定性鉴别；按照 2015 年版《中国药典》附录项下的方法，对该制剂的水分、粒度、溶化性、装量差异等进行检查；采用高效液相色谱法，对该制剂中的三种单酯型生物碱进行含量测定。对主要药效学进行了研究，通过采用慢性温和不可预知性刺激复制大鼠抑郁模型，同种刺激因素不能连续进行，不能使动物预料刺激的发生，进行了旷场试验、强迫游泳试验，测定了大鼠血清中 Cort、ACTH、5-HT 的含量，进行抗抑郁作用的研究。助阳开郁颗粒对小鼠未见明显毒性，在规定剂量下服用安全可靠。
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前 言
抑郁症正逐渐成为临床常见病。助阳开郁颗粒的研究开发，较好的适应了社会的需求，不仅具有较好的经济价值，更具有较为广泛的社会价值，有助于促进家庭和谐、社会和谐，并提高抑郁患者的生活质量。针对目前西药治疗抑郁症副作用大等问题，选择医院多年的临床验方为研究对象，将汤剂转化为使用和携方便的颗粒剂，作为治疗抑郁症的新型中药制剂，具有一定的创新性。以挥发油提取量为评价指标，进行工艺优选，确定挥发油的最佳提取工艺。以挥发油包合率为评价指标，对挥发油的包合工艺进行优选，确定其最佳的包合工艺。采用水提工艺对处方中其余药味进行提取，以总生物碱的含量为评价指标，考察该处方的最佳提取工艺。以成形率、溶化性、吸湿性为指标，筛选出制备颗粒剂的喷雾干燥、干法制粒的最优工艺以及最优辅料配比。首次对山西临床抗抑郁有效方阳开郁汤进行制剂研究，将科学研究与弘扬三晋文化相结合。组方原则特色明显，中医认为郁证是由于情志不舒、气机郁滞所引起的，通常采用疏肝解郁的方法来治疗。而助阳开郁颗粒的创新性采用温补肾阳来实现肾水足、脾土暖、心火生、肝木长、肝郁开舒，诸郁化解，为治疗抑郁症开辟新的途径。
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第一部分 制备工艺的优化
第一节 挥发油的提取及包合工艺的优化
挥发油 β-CD 包和物的制备方法通常采用饱和水溶液法和研磨法[6]。采用饱和水溶液法：称取 β-CD 8g，加水 100 mL 加热使其溶解，并冷却至恒温备用。缓缓将 2mL 的挥发油与 2 mL 的乙醇加入到已溶解的溶液中，在 40℃下搅拌器上搅拌 3 h，放冷 24 h 取结晶，抽滤，包和物加乙醇多次洗涤，置于 40℃干燥箱中干燥得包合物备用。采用研磨法：称取 β-CD 8g，加入 4 倍量水，在乳钵中沿同一方向研磨 15 min，将 2mL 的挥发油与 2mL 的乙醇加入到 β-CD 的水溶液中，研磨 3 h 成糊状，放冷 24 h 取结晶,抽滤，包和物加无水乙醇多次洗涤，置于 40℃干燥箱中干燥得包合物备用。以药物包和率和包合物收得率为指标[7]，采用饱和试验号 挥发油量（mL） 平均值 RSD（%）1 3.202 3.18 3.21 0.953 3.24水溶液法和研磨法各平行制备包和物三份，比较包合效果。结果得出药物包和率平均值分别为 36.65%、40.58%、60.78%，包合物收得率平均值分别为 69.34%、75.78%、80.67%，所以采用研磨法。
第二节助阳开郁颗粒的水煎煮工艺优选
临床用的是汤剂，疗效确切，为了更好的适应临床需要，所以提取方法采用水煎煮法。采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将砂仁（捣碎）、蛤粉、牡蛎、桂枝、黑顺片药材放入蒸馏烧瓶中，加 12 倍量的水（约 1600mL），浸泡 0.5h，用挥发油提取器提取挥发油 5h，得挥发油。加 5 倍量的 β-环糊精，用饱和水溶液法包合挥发油 4h，抽滤，加乙醇洗涤 3 次，低温干燥，粉碎，备用。药渣和药液备用，再将茯苓、炙甘草、黄柏加水煎煮，第一次加 8 倍量的水（约 1000mL），煎煮 1.5h，第二次加 6 倍量水（约 800mL），煎煮 1h，将两次的煎液和上述药渣和药液合并，离心，取上清液。减压浓缩至相对密度在 1.15-1.20（50-60℃），烘干，并研磨成细粉，加入 β-环糊精包合物的细粉，混和均匀。
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第二部分 质量标准研究.......................28
第一节 薄层色谱鉴别方法的建立...............28
第二节 含量测定方法的建立................33
第三部分 助阳开郁颗粒动物实验研究............42
第一节 抗抑郁药效研究...............42
第二节 急性毒性初步研究.............49
结 论...........................53
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第三部分 助阳开郁颗粒动物实验研究
第一节 抗抑郁药效研究
空白组大鼠未检明显异常行为状态，体重呈缓慢增长状态；模型组大鼠表现为易激惹，挣扎，有活动减少的状态，且对外界刺激反应减少，安静时埋首、拱背，大便松散且含水量大，皮毛失去光泽，体重与其他各组存在明显差异；给药组后体重能有所增长，易暴易怒的症状有所缓解[49]。实验前夜禁食禁水，实验开始时，将大鼠的饮用水改为 150 mL1%新鲜蔗糖溶液，2h 后撤走水瓶，通过称饮水瓶的重量计算大鼠蔗糖饮水量，其余时间水食不限，分别在造模前、造模后、给药 1 周、给药 2 周进行蔗糖饮水基线的测定。如表 3-1、图 3-1 。由图结果可知，模型组与空白组相比较，模型组的蔗糖饮水量显著低，表明抑郁模型造模成功；治疗组与模型组相比较，治疗组的蔗糖饮水量显著升高，说明治疗组的大鼠抑郁症状有明显的缓解，证明助阳开郁颗粒有一定的治疗抑郁的疗效。实验结果可知，与空白组比较，模型组旷场实验大鼠穿越横格数和直立次数均显著减少；给药 21 天后，与模型组比较，阳性药组以及助阳开郁药组各剂量组的大鼠穿越横格数和直立次数显著增加,结果见表 3-2。
第二节 急性毒性初步研究
随机选取 40 只小鼠，雌雄各半，禁食不禁水 12h。实验前称重，按体质量随机分为给药和对照组。给药组以本品可供灌胃的最大浓度 4.74g/mL，小鼠灌胃可承受的最大体积40mL/kg，一天内给药3次，相当于临床拟用剂量的306.30倍[56]，给药间隔不进食，给药 5h 之后自由进食进水，对照组给予同等体积的生理盐水，连续观察两周，详细记录动物每天的体质量、饮食量、饮水量以及死亡等情况[57]。两周之后进行解剖，观察各组脏器有无病变。半数致死量是药物急性毒性实验评价的一个重要指标，LD50越大，药物的毒性可能越低，本实验未测出助阳开郁颗粒灌胃给药小鼠的 LD50。最大耐受量实验结果表明，小鼠灌胃助阳开郁颗粒最大耐受剂量189.6g·kg-1，在相当于临床拟用剂量 102.10 倍时未见明显毒性，是一个比较安全的中药颗粒剂，为其进一步开发奠定了基础。
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参 考 文 献
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