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丹参通络解毒汤联合骨髓干细胞移植对急性心肌梗死大鼠内皮中医保护作用研究

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  • 论文编号:el2018062220501617211
  • 日期:2018-06-19
  • 来源:上海论文网
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本文是一篇中医论文,中医承载着中国古代人民同疾病作斗争的经验和理论知识,是在古代朴素的唯物论和自发的辨证法思想指导下,通过长期医疗实践逐步形成并发展成的医学理论体系。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇中医论文,供大家参考。
 
前 言
 
当前,由于社会经济的快速发展,居民生活环境、生活方式、饮食结构发生了重大变化,导致心血管疾病成为人类主要死亡原因。据美国心脏协会(AHA)发布的《心脏病与卒中统计数据(2017 版)》显示[1],2013 年美国 800937/2596993例死亡(30.8%)与心血管病相关。《中国心血管病报告 2015》和《中国卫生和计划生育统计年鉴》[2],目前,冠心病急性心肌梗死死亡率呈上升态势。在临床上处理急性心肌梗死的原则一直是要尽早恢复血液灌注,治疗多聚焦在介入、抗凝治疗,然而并不能使所有患者获益,原因是梗死后的心肌缺乏再生和修复能力,血管内皮功能的紊乱,大量的有害的血管活性物质、氧自由基、心肌细胞碎片等不能及时排出,营养物质和有益的细胞因子无法很好的运输,即使血管再通后一段时间有些患者也会再次出现狭窄和栓塞,或者梗死的心肌被取而代之的是无舒缩功能的瘢痕组织,最终导致心功能不全。因此,保护血管内皮,对促进血管和心肌的新生尤为重要。近年来骨髓干细胞移植因其强增殖和分化能力可以分化成心肌细胞为治疗心脏疾病带来了福音,同时无论是在细胞培养、动物实验或临床研究中均取得了令人鼓舞的结果。但仍存在如何提高 BMSCs 的存活率,如何有效的促进 BMSCs在心肌梗死区域分化成内皮细胞,进而促进血管新生等问题。因此有学者研究发现中药及其复方可以影响干细胞移植的微环境,对干细胞的动员、归巢、增殖和分化中起到优势互补、协同增效的作用,为中医药联合干细胞移植提供了一个切入点。
根据文献研究,急性心肌梗死当属于中医学中的胸痹心痛、厥心痛等病证范畴。近年来众多学者对“瘀”“热”“毒”得到进一步的认识,逐渐意识到“瘀”“热”“毒”也是导致胸痹心痛发生的重要病因。导师李鑫辉教授结合中医络病理论、温毒理论、现代研究和临床实践,认为“瘀”“热”“毒”是冠心病胸痹发生发展的重要病因,“瘀热壅毒,毒损心营”是胸痹心痛发病的一个重要病理过程,当以“活血通络,清营解毒,兼益气养阴”为基本治疗法则,选用《时方歌括》丹参饮和《温病条辨》清营汤化裁,自拟丹参通络解毒汤治疗这类胸痹心痛,临床效果肯定。我们前期研究证明,丹参通络解毒汤可以改善急性心肌梗死大鼠病理学形态,通过抑制 TLR4/NF-κB 信号传导途径,减轻心肌梗死后的炎症因子的释放,从而保护缺血心肌。本实验通过观察各组大鼠 MASSON 染色、血清 ET-1 和 NO 水平,免疫组化法观察心肌 vWF 蛋白表达以及 Western Blot 法检测心肌组织 EPCR、TM 的蛋白表达,深入探讨丹参通络解毒汤联合 BMSCs 移植对急性心肌梗死鼠内皮保护作用的分子机理,为“活血清营解毒法”和丹参通络解毒汤应用于临床提供了实验依据。
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第一部分 材料与方法
 
1 实验材料
1.1 动物
用以提取骨髓间充质干细胞的大鼠选取 3~4 周龄,SPF 级,雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠,控制体重在 90~100g,共 5 只,用以造模及移植的SD 大鼠选取同品系及来源的雄性大鼠 80 只,控制体重在 200~250g。由湖南中医药大学实验动物中心提供,购于湖南斯莱克景达公司。合格证号:43004700007002。动物许可证编号:SYXK(湘)2013-0005 湘。实验大鼠饲养于湖南中医药大学实验动物中心SPF级实验室,灯光明暗交替各12小时,分笼(2-4/笼)喂养,普通饲料饲养,自由饮食,给足水分,定期更换垫料并给笼具消毒,按时通风,保持环境 RT:(20-26)℃,RH:(55±5)%。
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2 实验方法
 
2.1 骨髓间充质干细胞的提取与培养
骨髓间充质干细胞的提取主要采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法[3],选取3~4周龄,SPF级,雄性SD大鼠,控制体重在90~100g,通过颈椎脱臼方法处死大鼠, 并将整只大鼠浸泡在75%酒精溶液中消毒5-10分钟;然后在经严格紫外线灯消毒后的环境下快速分离大鼠股部组织,取出股骨后用PBS液冲洗3遍;剪取骨髓腔后用DMEM培养液冲洗并收集冲洗液于离心机中离心,只留下管底部的干细胞,参数设置为(1500r/min,5min);管底部的细胞加入含胎牛血清的培养基,用一次性吸管反复吹打,轻轻吸吹制成单细胞悬液后进行细胞计数,以109/mL密度接种培养。培养箱条件参数设置为T37℃、饱和湿度、5%的CO2。在超净工作台上,用99.99%乙醇清洁计数板和专用盖玻片,然后放置在一边,等待酒精挥发晾干。取一小滴经过反复吹打均匀的单细胞悬液缓缓加入计数板中间平台两侧的沟槽,注意加入细胞悬液要适中,不能过少,也不能过多外溢出玻璃槽。然后对显微镜进行调整(10×物镜),在镜下观察计数板四角大方格中的细胞数目,即可计算原液的细胞密度为:平均每格细胞数×104/ML。
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第三部分 讨论........20
1 中医理论研究..........20
1.1 急性心肌梗死与中医研究范畴...........20
1.2 历代医家关于急性心肌梗死的病因病机概述......20
1.3 瘀热壅毒,毒损心营与急性心肌梗死的联系......21
1.4 历代医家对胸痹心痛治法及活血清营解毒法理论阐述..........23
1.5 丹参通络解毒汤的理论基础及方药分析....24
2 BMSCs 治疗急性心肌梗死及中医药干预作用........25
2.1 现代医学治疗急性心肌梗死概述.......25
2.2 BMSCs 移植治疗急性心肌梗死机理研究.....26
2.3 中医药干预 BMSCs 移植的研究........26
3 内皮保护与急性心肌梗死.........27
3.1 丹参通络解毒汤对 ET-1、NO 水平的影响............28
3.2 丹参通络解毒汤对 vWF 表达的影响............28
3.3 丹参通络解毒汤对 EPCR、TM 表达的影响............29
第四部分 结论......31
 
第三部分 讨论
 
1 中医理论研究
1.1 急性心肌梗死与中医研究范畴
急性心肌梗死是由于各种原因引起冠状动脉变窄或痉挛为基础,引发血栓梗塞动脉,最终导致心肌持续供血和供氧不足而坏死为病理特征。历代中医古籍虽然没有急性心肌梗死的病名描述,但是有相关的临床表现描述和现代医学急性心肌梗死描述一致,如发病时多出现持续而剧烈的心前区压榨性疼痛,放射至四肢及肩背的描述有《素问·脏气法时论》:“心病者,胸中痛,胁支满,胁下痛,膺背肩胛中痛,两臂内痛。”《灵枢厥病篇》:“厥心痛,痛如以锥刺其心,心痛甚者。”《类证治载》:“真心痛,猝大痛……手足青至节”。《肘后备急方》:“胸痹之病,令人心中坚痛忽痛,肌中苦痹,绞急如刺”;常伴有躁动、大汗出、昏厥,病情凶险等描述有,唐代孙思邈《千金方》:“胸痹之病,令人心中坚满痞急痛,肌中若痹,绞急如刺,不得俯仰……时欲呕吐,烦闷,自汗出,或彻引背痛,不治之,数日杀人”。《医编杂病》:“真心痛其症卒然大痛,咬牙噤口气冷,汗出不休,面黑,手足青过节,冷如冰,旦发夕死,夕发旦死。”同时1987年全国中医学会内科学会确定了“心痹诊断及疗效评定标准”,统一“急性心肌梗死”为“真心痛”。综上所述,急性心肌梗死当属于中医学中的胸痹心痛、心痹、真心痛和厥心痛等病证范畴[6-7]。
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结论
 
1. 丹参通络解毒汤可以明显提高心肌组织血管内皮细胞蛋白 C 受体( EPCR)、血栓调节蛋白(TM)表达,降低血管性假性血友病因子(vWF)蛋白表达,降低血清 ET-1 水平,升高 NO 水平,抑制心肌组织制胶原纤维增生,改善心肌病理形态,抑制血栓形成,保护血管内皮,且联合干细胞移植时效果更强。
2.丹参通络解毒汤联合 BMSCs 移植可以明显提高 EPCR、TM 蛋白表达,降低vWF 蛋白表达,降低 AMI 鼠血清 ET-1 水平,升高 NO 水平,保护血管内皮,从而减少胶原纤维产生,保护缺血心肌。
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参考文献(略)
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