药学论文哪里有？本论文从细微调节小胶质细胞表型M1/M2极化的角度揭示了Sarcodonin A的抗神经炎机制。
第一章 文献综述
1.1 AD和神经炎症的关系
随着老龄化社会的深入发展，与衰老密切相关的神经退行性疾病（Neurodegenerative Diseases，ND）已成为全球性的公共健康问题和社会问题。神经退行性疾病通过毁坏维持正常脑功能的神经元，引发脑损伤或躯体功能障碍，主要包括阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease，AD）、肌萎缩侧索硬化症 （Amyotrophic Lateral Sclerosis，ALS）、亨廷顿病（Huntington's Disease，HD）和帕金森病（Parkinson’s Disease，PD）等。其中发病率最高的AD已被世界卫生组织列为 21 世纪严重危害人类健康的五大疾病之一。每3秒钟全球就有1人被确诊罹患AD。国际阿尔茨海默病协会预估2050年全球AD患者数目将激增到1.52亿。在我国，AD患者数量已超过千万，居世界首位。目前全球社会AD相关成本为1万亿美元，到2030年这一数字将翻一倍。这极大地降低相关人群的生活质量，并增加患者家庭乃至整个社会的负担。因此研发安全有效的AD防治药物，已成为我国乃至全球医药领域的研究热点之一(Mitra et al 2019)。
一直以来，人类对抗AD新药都有着极其强烈的临床需求。目前已批准的治疗AD的临床药物包括胆碱酯酶抑制剂（如多奈哌齐、利瓦斯汀和加兰他敏）和N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂（如美金刚）两种类型。但遗憾的是，这些药物仅对AD症状有所缓解，但难以阻止疾病的进展。这主要是因为：AD是一种多因素导致的神经退行性疾病（图1-1），主要病理学特征有β-淀粉样蛋白（β-amyloid，Aβ）斑块沉积、胞内神经元纤维缠结（Neurofibrillary tangles，NFTs）、氧化应激（Oxidative Stress，OS）、神经炎症（Neuroinflammation）及神经递质缺乏（Neurotransmitter deficiency）等(Fish et al 2019, Revi 2020)。AD的发病机制十分复杂且目前尚未研究清晰，科学家们提出了许多相关的病理假说, 包括β-淀粉样蛋白假说、Tau 蛋白过度磷酸化假说、胆碱能假说以及神经炎症假说等。其中，β-淀粉样蛋白假说的提出距今已超过25年，该假说认为具有神经毒性的Aβ的聚集和清除障碍是推动AD病症发生和发展的源动力。然而，众多AD药物研发试图通过降低Aβ的合成或加速清除异常聚集的Aβ以降低Aβ水平的临床试验屡战屡败(Selkoe & Hardy 2016)。事实上，随着研究的深入，Aβ假说被证明只是AD发生中后期的一种病理表现，并不能全面清楚地阐述 AD 发生的原因和内在机制。由此引发了人们对寻找抗AD新靶点的探索 (De Strooper & Karran 2016, Makin 2018)。
第二章 鸟巢烷二萜Sarcodonin A及其衍生物的抗神经炎活性及机制研究
2.1 引言
Sarcodonin A是一种从鳞盖肉齿菌Sarcodon scabrosus（Fr.）Karst.的子实体中分离出来的典型的cyathane型二萜，对NGF诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中的神经突起生长具有显著的促进作用(Shi et al 2011)。Sarcodonin A及其19-O-亚油酸基、19-O-油酰基、19-O-硬脂酰和19-O-酰基衍生物通过局部应用对12-O-十四烷基佛波醇-13-乙酸酯（TPA）诱导的小鼠耳炎症具有抑制活性(Kamo et al 2004)。此外，与Sarcodonin A结构类性的neosarcodonin O可有效抑制LPS激活的巨噬细胞Raw264.7中NO的生成(Han et al 2013)。这些报道提示了Sarcodonin A可能具有潜在的抗神经炎活性。因此，我们围绕Sarcodonin A（1）及其六种衍生物（图2-1），即19-O-苯甲酰衍生物（2-6）和14，19-O-乙酰衍生物（7），以LPS诱导的BV-2小鼠小胶质细胞和HMC3人小胶质细胞为体外模型测试其抗神经炎症活性。进一步，从调控小胶质细胞M1/M2极化的角度阐释其抗神经炎的作用机理。最后探讨参与其中的细胞信号通路。以此初步揭示Sarcodonin A及其衍生物抗神经炎的分子机制。这些研究将为抗AD药物的开发提供有益的参考。
第三章 三烯霉素Trienomycin A抗神经炎机制的初步探索
3.1 引言
天然先导化合物是创新药物研究的重要基础。目前超过50%的临床药物都直接或间接来源于天然产物或其衍生物。安莎霉素(ansamycins)类化合物是一类主要由放线菌产生、结构较复杂的大环内酰胺类化合物。安莎霉素类化合物大都有较强的抗癌、抗病毒及抗真菌生物活性。例如格尔德霉素(geldanamycin)和美登木素(maytansine)衍生物用于肿瘤治疗，利福霉素(rifamycins)的衍生物用于治疗结核等(孟庆国 & 刘浚 2000)。这类抗生素由于其复杂的结构、较强的生物活性以及较好的成药性，引起国内外的广泛关注(Skrzypczak & Przybylski 2022)。
我们通过靶向神经炎症筛选体系，从本实验室化合物库中筛选到天然小分子化合物三烯霉素A（Trienomycin A，HQ4），属于安莎霉素类化合物（图3-1）。2015 年《Nat. Prod.Rep.》报道了代表性化合物 HQ4 的研究现状，对白血病、神经炎具有很强的抑制活性，但仅报道了有限的构效关系，作用机制尚不清晰，临床潜力有待进一步挖掘(Larsen et al 2015)。因此，深入探讨 HQ4 抗神经炎的功能和机理具有重要的科学意义和临床应用前景。
在本研究中，我们以LPS诱导的BV-2小胶质细胞为体外模型测试其抗神经炎症活性。进一步观察了HQ4作用下小胶质细胞M1/M2标志性蛋白的含量变化情况，最后探讨参与其中的细胞信号通路，以初步探索HQ4抗神经炎症相关的作用机制。
3.2实验方法
3.2.13.3.1一氧化氮（NO）检测
同第二章2.3.4
3.2.2 Western blotting
1）提取细胞总蛋白
在6 cm培养皿中培养的BV-2细胞（5×105个细胞/mL）经HQ4（0.01、0.02、0.04 μM）和阳性对照坦螺旋霉素（17-AAG，0.6 μM）、槲皮素（QU，20 μM）预处理30 min，然后加入LPS（1 μg/mL）诱导1 h（用于检测ERK1/2、p38 MAPK和JNK的磷酸化水平、Nrf2、HO-1和TLR4的蛋白表达），6 h（用于检测STAT3的磷酸化和HO-1的表达）或24 h（2×105个细胞/mL）（用于检测COX-2、iNOS、COX-1和ARG-1的蛋白表达）。为了确定不同时间蛋白的表达量差异，分别在0、3、6、12 h时收集蛋白。
2）分离核质蛋白
为了检测NF-κB p65的核质转移情况，在9 cm培养皿中培养的BV-2细胞（5×105个细胞/mL）分别经HQ4（0.01、0.02、0.04 μM）和阳性对照17-AAG（0.6 μM）预处理30 min，然后加入LPS（1 μg/mL）1 h。为了检测STAT3的核质转移，培养的BV-2细胞分别经HQ4（0.01、0.02、0.04 μM）和阳性对照槲皮素QU（20 μM）预处理30 min，然后加入LPS（1 μg/mL）5.5 h。
其他内容同第二章2.3.7
第四章 研究结果与创新
4.3 展望
4.3.1 鸟巢烷二萜Sarcodonin A及其衍生物的抗神经炎作用及机制研究
上述前期研究表明，通过体外神经炎细胞模型发掘了活性显著优于母体（1）的溴代19-O-苯甲酰基衍生物（6）。继而从多个层面阐明了1和6是通过调节小胶质细胞BV-2 M1/M2表型的动态平衡，逆转LPS引发的M1极化来发挥抗神经炎活性，并对其作用的细胞通路进行了初步探索。然而，为了阐明其作用的具体靶点及机制，还需要提供更多体内外抗炎特性的证据，后续将从以下方面开展进一步的研究：
（1）相比于细胞系，原代细胞离体时间短，更多保留了体内原始组织的生物学特征，能更好的反映细胞在体内的生长状态，因此可通过建立原代细胞炎症模型，从而获得与体内生理功能更接近的数据。
（2）寻找靶标，对衍生物的化学结构与靶标间的作用机制进行探讨。
（3）建立科学合理的神经炎症动物模型，进行体内抗神经炎活性评价。
4.3.2 三烯霉素A 的抗神经炎机制研究
上述前期研究基础表明，筛选到的天然小分子化合物 HQ4 能够安全有效地抑制 LPS 诱导的 BV-2 细胞 NO 的产生，可显著抑制促炎酶 iNOS 和 COX-2 的表达水平，在细胞水平表现出优越的抗炎活性。其极低的 IC50说明其极具后续深入研究和开发的价值。后续将从以下方面展开研究：
（1）在HQ4 结构基础上进行结构修饰和SAR研究以获得活性更高且易透过BBB的衍生物。
2）建立科学合理的神经炎症动物模型，并进行体内活性评价和机制。
参考文献（略）
