第一篇文献综述
第一章大豆抗原蛋白研究进展
1.1大豆抗原蛋白的定义
大豆抗原蛋白是指被人类和畜禽食入后，通常可以引起人类和畜禽发生过敏反应的，存在于生大豆内或者是大豆制品中的一些大分子物质，这些物质一般主要包括：大豆球蛋白(Glycinin)、P-伴大豆球蛋白（P-Conglycinin)、胰蛋白酶抑制因子、大豆抑制蛋白(Soybean Profilin)、大豆壳蛋白（Soybean Hull Protein)、大豆疏水蛋白（SoybeanHydrophobie Protein)和大豆空泡蛋白（Soybean Vacuolar Protein)等。目前，研究主要集中在免疫原性最强且对动物影响比较大的Glycinin和0-Conglycinin两种蛋白上。
1.2大豆抗原蛋白的分类及生物学特性
现已被确认的大豆致敏蛋白有36种，可以按超速离心法分类，并以蛋白质沉降系数来表示这些蛋白组分，大豆蛋白质一般可以分成四个组分，用沉降系数法表示为2 S,7 S，11 S和15 S。其中11 S和7 S组分被命名为大豆球蛋白(Glycinin)和伴大豆球蛋白（Conglycinin)，它们分别占总蛋白含量的40%^和30%左右。大豆球蛋白（Glycinin)是大豆中主要的储藏蛋白，占大豆籽实总蛋白的19. 5%?23.1Glycinin是大豆蛋白中最大的单体成分，相对分子质量为360 kDa,是由六个蛋白单体组成的六聚体，其单聚体亚基的结构形式为A-S-S-B。其中，A、B分别代表酸性多肽链和碱性多肽链，分子量分别为34?44 kDa和20 kDa, A和B间由一个二硫键（S-S)相互连接起来使12个亚基形成了两个稳定的环状六角形结构，成中空扁圆柱状，体积为11X 11 X 7.5 nni3。每个环上有6个亚基，六角环内各酸性亚基之间和碱性亚基之间均具有很高的同源性且结构稳定，静电或氢键作用维系着两个六角形间的结合。目前，大豆球蛋白中五种主要亚基形式已经被鉴别出来，分别为A,aB2、AlbBb、A2Bia、4B4和大豆球蛋白是由不同亚基组合而成的集合体。Glycinin的等电点为6.4，其中酸性亚基的等电点为4.80?5.50，碱性亚基的等电点为6. 50?8. 50。Glycinin中赖氣酸含量最高，而蛋氨酸含量低，疏水性氨基酸（如：丙氨酸、纖氨酸、异亮氣酸和苯丙氨酸）占23. 5%,亲水性氨基酸(如：赖氣酸、组氣酸、精氨酸、天冬氨酸和谷氨酸)占46.7%。Glycinin的次级结构中含有25%的a-螺旋、25%的折叠、42%的转角和8%的无规则卷曲。水合物中Glycinin的次级结构基本相同。Glycinin的三级结构中，色氣酸残基与侧链酪氨酸残基之比约为4: 1。Glycinin含有较多的含硫氨基酸，经过一些化学试剂或者热处理后，可断开其二硫键，使Glycinin的四级结构发生改变，并增加其溶解度温度在一定程度上影响Glycinin的结构和溶解性，采用冷冻干燥和低温je存的方法可降低Glycinin的溶解度，而使用加热的方法可增加其點度并形成预凝胶，在冷却后完全形成凝胶。Glycinin溶液低温存时还会出现二硫键聚合现象，形成不能溶解的沉淀或大小不同（14-22 S)的聚合体，此聚合体可被10 mM巯基乙醇或半胱氨酸还原为原有的溶解度。
伴大豆球蛋白也是一种主要的It藏蛋白，占大豆籽实总蛋白的10.0%-12.7%。e-Conglycinin与Glycinin相比，糖基结构（甘露糖残基和氨基葡萄糖的糖基化蛋白）更多，是一类糖基化蛋白质P -Conglycinin的分子量为140?180 kDa,它是由a、a ’和0三个亚基组成，分子量分别为58?77 kDa、58?83 kDa和42?53 kDa'^?',三个亚基的等电点分别为4. 90、5.18和5. 66?6. (KT，P -Conglycinin的三个亚基均属于潜在过敏原，都含有丰富的天冬氨酸/天门冬酰胺、谷氨酸/谷氨醜胺、亮氨酸和精氨酸，其中a亚基和a ‘亚基的氨基酸组成十分相似，二者中均含有少量的蛋氨酸且缺乏胱氨酸，而0亚基不含蛋氨酸，这三个亚基的共同点是，亚基内均含有4%?5%的碳水化合物，糖基结构较多，所以经常以糖基化蛋白定义P-Conglycinin。
第二章肠黏膜机械屏障的研究进展
动物肠道内有大量的微生物和毒素，为了避免肠内细菌等有害物质进入机体，肠道在长期的进化过程中逐渐建立了一套完善的肠點膜屏障系统。肠黏膜屏障是由肠上皮细胞、黏液层、黏膜免疫系统和肠道正常微生物群等组成的复杂防御体系，能有效阻挡肠内微生物及毒素向肠腔外扩散，并防止病原微生物入侵。肠點膜屏障功能一般可以用传统的机械屏障功能代表。机械屏障发挥其功能的主体部分是肠上皮细胞和相邻细胞间的连接，这两者共同组成了肠道的选择性屏障。各种细胞连接将肠上皮细胞与细胞间紧密的联系在一起，调控水和溶质分子的通过，禁止一些大分子物质的通过，所以紧密连接对维持上皮细胞极性、调节肠屏障通透性和防止危害机体的大分子物质进入体内发挥了重要作用。细胞连接主要包括：紧密连接(tight junction, TJ)、點附连接(adhesion junction)、桥粒(desmosome)和缝隙连接（gap junction)。紧密连接与肠道内物质吸收关系最为密切，是反映上皮细胞机械屏障功能的最重要的结构。
第二章大豆球蛋白对仔猪小肠上皮细胞活性......... 16
2.1材料与方法......... 16
2.2结果与分析......... 18
2. 讨论......... 20
2.4小结......... 21
第三章大豆球蛋白对仔猪肠上皮细胞紧密连接......... 22
3.1材料与方法......... 22
3.2结果与分析......... 25
3. 3讨论......... 30
3. 4 小结......... 30
结论
1.1大豆球蛋白可造成仔猪小肠上皮细胞活性降低，通透性增加。随大豆球蛋白添加浓度的升高，仔猪小肠上皮细胞活性呈线性下降趋势，细胞膜通透性呈逐渐上升趋势。
1.2大豆球蛋白可影响紧密连接蛋白Z0-1和Occludin的分布和表达。随大豆球蛋白添加浓度的升高，紧密连接蛋白Z0-1和Occludin的免疫焚光信号均逐渐减弱，且Z0-1和OccludintnRNA相对表达量均呈逐渐下降趋势。
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