中医论文哪里有？本研究重点探索了 HPA 轴启动中枢下丘脑室旁核 CRH 及其最为相关的蓝斑核 NE，未来的研究有待进一步探索 HPA轴变化与 5-HT、Ache、GABA 等神经递质的联动关系。
1.实验技术路线
1.1 实验总体技术路线图
本实验的总体设计分为两部分（如下图所示），首先是通过“以方测证”研究来确定动物的中医证候模型，在此基础上观察 HPA 轴对肝郁化火证失眠大鼠睡眠结构等影响。由于前期已采用“以方测证”方法对动物证候模型进行研究[28]，本文重点报告 HPA 轴调节机制的相关研究，对于同步实验的“以方测证”研究内容，仅在讨论部分进行简要报告。
3.数据处理与分析
采用 SPSS19.0 统计软件处理数据，计量资料以均数±标准差（x±SD）表示，组间比较采用单因素方差分析。两两比较，方差齐则采用 Bonferroni 法，方差不齐则采用 Tamhane’T2 法。以 P＜0.05 作为组间差异具有统计学意义的标准。
5.讨论
5.1 肝郁化火证是失眠最常见的证型之一
肝郁化火证是失眠最常见的证型之一。中华人民共和国中医药行业标准《病证诊断疗效标准》（ZY/T001.1-94）拟订失眠常见证为肝郁化火证、痰火内扰证、阴虚火旺证、心脾两虚证和心虚胆怯证。2016 年中医中医科学院失眠症中医临床实践指南课题组发布在世界睡眠医学杂志的“失眠症中医临床实践指南 （ WHO/WPO）”总结肝郁化火证失眠证候诊断标准为“突发失眠，性情急躁易怒，心烦不能入睡，或入睡后多梦惊醒。胸胁胀闷，善太息，口苦咽干，目赤，小便黄，大便秘结，舌质红，苔黄，脉弦数” [45]。研究表明，失眠的中医证型数量少则数个，多则十余个[17，46-49]。有研究分析11640例失眠患者失眠症证候要素，发现肝郁化火证占13.32%[17]；分析 1379 例原发性失眠的证型临床特征，发现失眠患者阳证居多，阳证又以肝郁化火证多见[16]；一项系统分析研究了 9949 例失眠患者的中医证型分布规律，发现肝郁化火证占 9.7%[18]。
失眠的基本病机为“阴阳失交”[50-51]，阳不入阴则失眠，这是失眠症所有证型都具有的共性本质。在这一基本病机之下，失眠还有另外一个重要病机“神识扰动”[52]，明代医家张景岳在《景岳全书·不寐》中提到：“寐本乎阴，神其主也，神安则寐，神不安则不寐”，强调了“神识扰动”在失眠发病机制中的重要性。肝郁化火证的“证机”是肝气郁结，郁而化火，以致神识扰动。
5.2 慢性束缚加疼痛刺激模型大鼠的睡眠结构特点
睡眠结构与睡眠质量密切相关，2007 年美国睡眠医学会（AASM）手册认为成人睡眠由非快速眼动睡眠 NREM 睡眠（浅睡眠 N1、N2 和深睡眠 N3）及其快速眼动睡眠 REM 睡眠组成[53]。临床研究中，通常会采用多导睡眠记录仪来检测并分析睡眠结构与睡眠质量[54-55]，包括睡眠潜伏时间（sleep latency ，SL）、快速眼球运动（rapid eye movement，REM）、非快速眼球运动（non-rapid eye movement，NREM）、慢波睡眠（slow wave sleep ，SWS）、微觉醒总次数、总睡眠时间（total sleep time ，TST）等睡眠参数。其中，睡眠结构相关指标包括卧床总时间、睡眠总时间（NREM+REM）及睡眠持续时间睡眠潜伏期[56]。睡眠潜伏期是指完全清醒到睡眠所需的时间，睡眠持续时间是指从入睡到完全清醒的时间。
睡眠障碍在睡眠结构方面主要表现为睡眠时间减少和入睡困难 [57]，常见入睡困难（睡眠潜伏期大于半小时）、睡眠维持障碍（即睡眠持续时间缩短，整夜觉醒次数大于 2 次）、早醒、睡眠质量低下和总睡眠时间不足等症状[3]。因此，在动物实验研究中，通常翻正实验来分析睡眠结构，评价睡眠质量。
翻正实验也称为戊巴比妥睡眠协同实验，其有效指标是睡眠潜伏期和睡眠持续时间，用于评价睡眠和觉醒关系，常用于安眠药物、醒酒药物的药效评价[58-60]，以及失眠动物模型检验[34，66]，睡眠潜伏期增加和（或）睡眠持续时间降低则视为失眠造模成功。
问题与展望
本实验主要探索肝郁化火证失眠模型大鼠的睡眠结构特点及 HPA 轴调节机制，在采用相应经典方剂治疗干预“以方测证”的基础上，采取外周 cortisol 干预，观察大鼠一般情况、体质量、摄食量、高架十字迷宫实验 OE%和 OT%值、鼠尾悬挂静止时间，采用翻正实验评价睡眠结构，采用免疫组化法检测大鼠下丘脑室旁核组织中 CRH1、垂体 ACTH、蓝斑核 NET，采用酶联免疫法检测血清中 CORT、DA、NE 含量，观察大鼠大脑海马组织病理形态，取胸腺及脾脏计算胸腺指数和脾脏指数，从而探讨肝郁化火证失眠大鼠的睡眠结构特点及其 HPA 轴调节机制。
研究取得预期结果，但下列问题也有待进一步研究：
1. 睡眠结构分型有多种方式，本实验采用翻正实验评价睡眠结构，主要观察了睡眠潜伏期和睡眠持续时间，未来的研究有待进一步探索神经电生理检测的睡眠结构，以及 24 小时昼夜节律变化特点。
2. 睡眠调节涉及多个中枢核团与神经递质，本研究重点探索了 HPA 轴启动中枢下丘脑室旁核 CRH 及其最为相关的蓝斑核 NE，未来的研究有待进一步探索 HPA轴变化与 5-HT、Ache、GABA 等神经递质的联动关系。
参考文献（略）
