医学论文哪里有？本研究构建的肠炎沙门氏菌鼠源噬菌体单链抗体库，可用于筛选抗肠炎沙门氏菌特异性单链抗体，后期可尝试选取不同沙门氏菌不同抗原位点的特异性蛋白进行筛选，从该库中筛选出更多针对不同血清型、不同蛋白位点的scFv；
1.材料
2.9 phage ELISA重复性试验
（1）批次内重复性 取同一批次制备的酶标板对构建的phage ELISA检测方法进行批次内重复性试验验证。分别对肠炎沙门氏菌C50041、J06和J15这3个菌株（每个菌株各3份）进行检测，每个菌株样品设置3个平行组。
（2）批次间重复性 取不同生产批次的酶标板进行批次间重复性试验验证，分别对肠炎沙门氏菌C50041、J06和J15这3个菌株（每个菌株各3份）进行检测，每个菌株样品设置3个平行组。
3. 结果与分析
3.1 phage-scFv-4构建验证
将辅助噬菌体M13KO7ΔpIII活化滴定后，按照说明书中标注的MOI=20侵染pCANTAB5E-scFv-4。以纯化灭活后的肠炎沙门氏菌C50041作为阳性抗原，分别以M13KO7ΔpIII、phage-scFv-4作为一抗，HRP-anti-pⅧ作为二抗。通过Western Blot结果验证，M13KO7ΔpIII作为一抗无法与肠炎沙门氏菌特异性结合，而phage-scFv-4作为一抗可以实现特异性结合，从而证实重组噬菌体单链抗体phage-scFv-4的成功构建。
3.2 抗原最佳包被浓度的确定
用CBS包被液对菌液包被浓度进行104 CFU/mL、105 CFU/mL、106 CFU/mL、107 CFU/mL、108 CFU/mL、109 CFU/mL、和1010 CFU/mL作为7个不同浓度的梯度稀释，向酶标板中每孔加入不同稀释度的混合液100 µL，以确定抗原最佳包被浓度，结果如图3-2中显示，在抗原包被浓度为108 CFU/mL时，检测OD450的P/N值平均数最大，高达4.5。
4. 讨论
据欧洲食品安全局统计，受沙门氏菌污染的蛋、禽等相关农副产品的影响，每年有超9万人患上沙门氏菌病，因此被认证为欧盟食源性人畜共患病的第二大常见病原菌[88-90]。截至2015年，中国累计上报食源性疾病发病破2万人，其中由沙门氏菌所致食物中毒病例排在首位。目前临床及文献报道的对于沙门氏菌的检测方法包括传统的细菌培养[91]、生化鉴定[92]、血清学测试[93]、免疫学检测法[94]、测序技术[95]、噬菌体分型[96]和生物传感[97-99]等，但截至目前对沙门氏菌的检测方法仍不够完善，无法实现快速灵敏、高特异的临床检测。本研究由肠炎沙门氏菌噬菌体单链抗体库中筛选到的scFv-4构建重组噬菌体单链抗体，由于pCANTAB5E噬菌粒载体缺乏噬菌体组装所需的其他结构基因，无法自行包装成新噬菌体，所以需要借助辅助噬菌体侵染。为避免出现大量野生型M13KO7影响后续检测结果准确性，故选用Hyperphage M13KO7ΔpIII作为辅助噬菌体，构建重组噬菌体单链抗体phage-scFv-4，并基于此建立了一种针对沙门氏菌的phage ELISA试验方法。Hyperphage M13KO7ΔpIII的使用不仅可以避免存在大量野生型M13KO7的导致沙门氏菌检测结果不准确，同时由于scFv均与pCANTAB5E的pIII融合，M13KO7ΔpIII所包含的pⅧ可以与使用的pⅧ二抗联用实现信号放大，实现phage ELISA的检测限降低。
在初步构建好phage ELISA方法后，通过设置不同phage ELISA检测条件以探索最佳试验条件，最终确定最佳检测条件为：最佳抗原浓度为108 CFU/mL（100 µL/孔），4℃包被过夜，phage-scFv-4最佳稀释倍数为1:600，37℃孵育2 h，以1:10000的最佳稀释比例稀释HRP-anti-pⅧ二抗，37℃条件下再孵育1 h，最终显色15 min后终止反应。用该方法检测肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌等，结果显示本研究建立的phage ELISA检测方法重复性较好，可以特异性检测出肠炎沙门氏菌，最低检测限为104 CFU/mL，灵敏度较好。
全文结论
展望
本研究目前已构建出肠炎沙门氏菌鼠源噬菌体单链抗体库，并且筛选出特异性良好、亲和力强的单链抗体scFv-4，建立了一种基于单链抗体的沙门氏菌phage ELISA检测方法，对于接下来的研究工作可以从以下几点入手：
（1）本研究构建的肠炎沙门氏菌鼠源噬菌体单链抗体库，可用于筛选抗肠炎沙门氏菌特异性单链抗体，后期可尝试选取不同沙门氏菌不同抗原位点的特异性蛋白进行筛选，从该库中筛选出更多针对不同血清型、不同蛋白位点的scFv；
（2）对于本研究已筛选出的scFv-4可深入探索研究对应的靶标蛋白，根据靶标位点进行更详细的实际检测应用；
（3）本研究所建立的沙门氏菌phage ELISA检测方法据目前与其他部分肠科菌的比较结果显示特异性良好，后期可扩大阴性对照的菌种范围，并采集疑似的临床病料进行实际样品的检测。
参考文献（略）
