医学论文哪里有？本试验以预防、治疗和直接杀灭三种给药方式研究IRPS抑制PRRSV JXA1体外增殖作用。IRPS浓度为0.015625 mg/mL时，预防组和直接杀灭组抗病毒效果最佳；浓度为0.0625 mg/mL时，治疗组效果最佳。抗病毒作用预防作用＞杀灭作用次之＞治疗作用，预防和杀灭作用呈负相关剂量依赖性，治疗作用呈正相关剂量依赖性。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
南美胎牛血清，美国CLARK 公司产品；PRRSV N抗体，北京博奥森生物技术有限公司产品；DAPI染色液，北京雷跟技术有限公司产品；牛血清白蛋白，北京索来宝科技有限公司产品；反转录酶，Vazyme产品；PITC标记的山羊抗兔IgG，鼎国产品；荧光定量mix，Vazyme产品。
1.1.2 主要仪器
CO2细胞培养箱、生物安全柜、酶标仪，美国 Thermo 公司产品；超净台，苏州净化产品；荧光定量PCR仪，美国 Bio-Rad 公司产品；荧光显微镜，上海光学仪器厂产品。
1.1.3 细胞、药物及毒株
3D4/21/CD163细胞系，由河南省农业科学院动物免疫学重点实验室惠赠；PRRSV JXA1株（TCID50为10-5.25），由河南农业大学田克恭老师惠赠；板蓝根饮片，购自郑州张仲景大药房。
3 结果与分析
3.1 TAK-242最大安全浓度的测定
在文献记载的TAK-242最大安全浓度（80 μmol/L）基础上往下倍比稀释，各浓度的TAK-242对3D4/21细胞未表现出细胞毒性，反而促进了细胞增殖，见图4-1。
4 结论与讨论
4.1 IRPS抑制PRRSV JXA1增殖的最佳作用方式和浓度的研究
本试验以预防、治疗和直接杀灭三种给药方式研究IRPS抑制PRRSV JXA1体外增殖作用。IRPS浓度为0.015625 mg/mL时，预防组和直接杀灭组抗病毒效果最佳；浓度为0.0625 mg/mL时，治疗组效果最佳。抗病毒作用预防作用＞杀灭作用次之＞治疗作用，预防和杀灭作用呈负相关剂量依赖性，治疗作用呈正相关剂量依赖性。分析试验结果得到IRPS抗PRRSV JXA1的最佳浓度和抗病毒效果与用药时间先后有关。预防作用是让药先于病毒与细胞持续作用4 h，杀灭作用为药物和病毒共同作用于细胞2 h，治疗作用是病毒感染细胞2 h，然后用药，最佳作用浓度依次递增，抗病毒作用则依次降低。
PRRSV属于有囊膜的RNA病毒，主要通过胞吞进入细胞。该试验出现以上结果可能是由于：（1）IRPS的某种成分够与PRRSV竞争性结合相关受体，从而抑制病毒进入细胞；（2）IRPS可以通过与模式识别受体作用，提前启动固有免疫，由于这个过程需要一定时间，因此用药时间越早抗病毒效果越好，亦或者两种反应均存在。治疗作用所需浓度较高，效果不及其他两种作用方式，可能是最先与细胞作用的两小时已有部分病毒已经进入胞内，此时则需要更高浓度的IRPS激活细胞的免疫机能。王学兵[68]等发现IRPS能够很好的阻断PRRSV对Marc-145细胞的侵入，这与我们的试验结果和猜想一致。接下来的试验主要从固有性免疫方面分析IRPS抑制PRRSV体外增殖作用。
4.2 IRPS对PRRSV JXA1复制环节的影响
病毒通过吸附、脱壳、生物合成、组装和释放进行胞内复制，如果其中一个环节被抑制，那么复制将无法完成。本试验通过研究IRPS对PRRSV吸附、侵入和胞内增殖的影响，进一步说明IRPS抑制PRRSV体外复制的环节。PRRSV吸附细胞分为两个过程，一是非特异性的通过静电引力与细胞膜接触，这与细胞膜的流动性有关；二是特异性的与受体结合。试验结果表明IRPS显著抑制PRRSV对细胞的吸附，使病毒载量下降了88.36%。因此我们重点分析IRPS对PRRSV吸附环节的作用。
在4°C进行吸附试验，能够降低细胞膜流动性，减弱非特异性吸附作用并使细胞的内吞作用减弱，此时PRRSV以特异性吸附为主且不会进入胞内，这使得研究病毒的吸附和侵入环节更方便。结果发现多糖对特异性吸附环节阻断效果显著（p＜0.0001），因此推测IRPS可能通过影响PRRSV与细胞膜的特异性受体结合效率而抑制PRRSV吸附。IRPS影响PRRSV吸附环节可通过两个方面分析：一是病毒方面，二是受体方面。多糖激活固有免疫，使细胞在被PRRSV JXA1感染时能够迅速分泌抗病毒因子，阻止病毒对细胞的吸附作用；而硫酸乙酰肝素和唾液酸黏附素是与PRRSV吸附相关的两个受体，IRPS成分复杂是有可能通过结合或破坏两受体，实现对PRRSV吸附环节的抑制作用，这有待进一步研究。
全文总结
1. IRPS体外抑制PRRSV JXA1增殖的最佳浓度为0.015625 mg/mL，最佳给药方式为预防作用，药物主要作用于PRRSV JXA1的吸附环节。
2. PRRSV JXA1引起了IFN-β和IFN-γ分泌的不足，并促进了IL-1β和IL-8的表达。IRPS对PRRSV JXA1引起的IFN-β和IFN-γ表达不足和IL-1β和IL-8表达上调有显著抑制效果，并且促进了PRRSV JXA1感染前期IL-10的蛋白翻译，下调了感染后期期IL-10的蛋白翻译。整体双向调节了PRRSV JXA1感染引起的细胞因子非正常表达。
3. IRPS在多数时间双向调节了TLRs的mR NA和蛋白表达，整体上调了TLR4和TLR9的蛋白翻译水平，发挥双向免疫调节的同时促进了TLRs下游抗病毒因子的合成。
4. IRPS主要通过TLR4/NF-κB发挥抗PRRSV JXA1体外增殖作用。IRPS相对于病毒对照组和细胞对照组均促进CD163的蛋白表达，当TLR4被阻断时IRPS可能通过促进CD163的表达帮助PRRSV JXA1侵入细胞。
参考文献（略）
