医学论文哪里有？本试验选取miRNA-21为研究对象，借助TargetScan、miRBase等软件在线预测并筛选出与毛囊发育相关的靶基因，并通过体内外试验检测miRNA-21及其靶基因在不同发育时期绒山羊皮肤组织中的表达，鉴定两者的靶向关系，初步阐明miRNA-21在毛囊发育周期中的作用，为以后提高产绒量提供理论依据。
1. 实验方法
1.1 野生型和突变型目的片段的合成
选用psi-CHECK2 质粒（图3.1）作为载体，将野生型和突变型目的片段连接到载体上，根据miRNA-21与靶基因的结合位点两侧的序列以及两端加上的XhoI 和 NotI 的酶切位点设计引物序列。（表3.1）
3. 实验结果
3.1. 重组质粒载体的构建及靶基因测序结果
设计的靶基因野生型和突变型序列（图3.1）。将构建的质粒送去测序，将菌液测序结果（图3.2）和目的片段进行对比鉴定，结果显示设计序列与测序结果一致，表明靶基因野生型和突变型重组质粒构建成功。借助NCBI Blast 分析进行序列同源性对比，FGF18和SMAD7和绵羊、牛等其他物种的相似度在95%以上（图 3.3），说明扩增的靶基因目的片段物种同源性高，可在绒山羊皮肤正常表达。
3.2 双荧光素酶鉴定靶向关系
将miRNA-21 mimics/nc分别和野生型/突变型以及空载体质粒分组转染HEK-293T 细胞，经过荧光素酶报告系统鉴定结果显示：与阴性对照组相比，miRNA-21 mimics和FGF18-WT共转染组荧光活性显著高于突变型，差异极显著（****P<0.0001），与SMAD7-WT共转染组荧光活性显著高于突变型，差异极显著（***P<0.0001），并且突变型与空载体变化不大(图3.4)。该结果表明，FGF18和SMAD7为 miRNA-21的靶基因。
4. 讨论
通常，miRNA编码基因由RNA聚合酶II转录并产生初始转录本，这些转录本由RNase III-内切酶DROSHA和DICER处理成约21个核苷酸的小RNA。所有miRNA都加载到RNA诱导的沉默复合物（RISC）中的Ago蛋白中，并通过与mRNA的3′- UTR结合来充当转录后调节剂。miRNA引起靶mRNA转录后抑制，而导致抑制的原因一般是由于mRNA水平降低或者翻译效率下降。当miRNA与靶mRNA之间的互补较为完整时被认为其能够导致mRNA降解，而当互补性较低时则会导致翻译抑制[123]。如研究测试骨折老年妇女和卵巢切除（OVX）小鼠骨标本中miR-103-3p和骨形成标志物基因的表达，发现miR-103-3p与METTL14呈负相关[124]。miR-27a能够通过靶基因WNT3A和KITLG影响绒山羊毛色形成，并且负调控靶基因的表达[125]。
尽管大多数miRNA与靶mRNA的3’ UTR相互作用以抑制其表达，但随着对miRNA的研究不断进行，发现miRNAs还可能激活基因表达。肖敏等人研究发现在细胞核中的miRNA可以通过与增强子的结合改变增强子的染色质状态，从而激活基因的转录和表达[126]。Shobha Vasudevan团队发现microRNA-Let-7和合成的microRNA-cxcr4同样能够在细胞周期停滞时诱导靶mRNA翻译的上调，miRNAs的翻译调节在细胞周期内在抑制和激活之间转换，确定miRNA可以上调翻译[127]。Huang等人的研究发现miR-744通过促进RNA聚合酶II（RNAP II）的富集和CCNB1转录起始位点赖氨酸4（H3K4me3）组蛋白3的三甲基化来上调CCNB1的表达[128]。
结论
miRNA-21通过正向调控靶基因FGF18和SMAD7的表达从而抑制绒山羊毛囊发育。
参考文献（略）
