医学论文哪里有？笔者认为机体是一个复杂环境，进一步研究需完善体内实验，在动物模型中验证瘤源性 vWF 对肿瘤发生发展的调控作用及机制，为肿瘤的靶向治疗提供新的研究思路。
一 前言
1.2 血管性血友病因子与肿瘤的关系
血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）是存在于血浆中的一种大分子糖蛋白，vWF 前体（pro-vWF）由 2813 个氨基酸组成，其中信号肽 22 个，前肽 741 个，成熟亚基 2050 个[19]。pro-vWF 在分泌前会经过广泛的翻译后修饰，pro-vWF 蛋白的信号肽被切割后进入内质网，在内质网中形成 vWF 二聚体，随后该二聚体被转运至高尔基体中进行进一步修饰并形成高度糖基化的多聚体[20]。vWF 大部分由内皮细胞合成，部分由巨核细胞合成[21]。内皮细胞产生的 vWF 通常储存在 W-P 小体（Weibel-Palade body，WPB）中，而巨核细胞产生的 vWF储存在α-颗粒中[22]。受到各种病理性刺激或炎症因子的刺激时 vWF 大量释放，循环中的 vWF 以超大型形式(ULvWF)存在，ULvWF 由几百个 vWF 单体组成，在循环中会被应力、碰撞以及与血管壁的分子相互作用破坏。有实验发现在小鼠模型中，循环中的 vWF 主要由肝脏吸收，部分由脾脏和肾脏吸收[23]。
1.2.1 vWF 的生物学作用
vWF 具有两种重要的生物学功能：介导血小板的粘附和聚集、凝血因子 VIII的载体蛋白[24]。有研究发现 vWF 不仅在血栓形成过程及止血过程中有重要调节作用，而且还参与调节血管生成、平滑肌细胞的增殖、免疫系统的正常运作等，并已成为多种疾病的生物学标志物[25,26]。vWF 作为一种重要的内皮损伤标志物，可作为许多疾病的诊断或预后指标[22]。近年来研究发现 vWF 与肿瘤发生发展密切相关，vWF 作为肿瘤发生发展过程中重要的调节因子，有望成为肿瘤诊断、治疗的新靶点。
三结果
3.1 生信分析 vWF 在胃癌中的表达及与胃癌患者预后的关系
首先，我们分别分析了 GSE19826 数据集、GSE27342 数据集以及 GSE13911数据集中 vWF mRNA 在胃癌组织以及正常组织中的表达情况；GSE19826 数据集收集了 12 例胃癌组织及 15 例正常组织并对其 vWF mRNA 表达进行检测，结果如图 3.1A 显示，与正常组织相比，胃癌组织中的 vWF mRNA 表达水平显著增高（P=1.68E-4）；GSE27342 数据集收集了 80 例胃癌组织及 80 例正常组织并对其 vWF mRNA 表达进行检测，结果如图 3.1B 显示，与正常组织相比，胃癌组织中的 vWF mRNA 表达水平增高（P=0.046）；GSE13911 数据集分别收集了6 例弥漫性胃腺癌、26 例胃肠型腺癌及 31 例正常组织并对其 vWF mRNA 表达进行检测，结果如图 3.1C 和 D 显示，与正常组织相比，弥漫性胃腺癌及胃肠型腺癌组织中的 vWF mRNA 表达水平均升高（P=0.002，P=0.026）。进一步我们使用 TCGA 数据库对不同级别淋巴结转移患者胃癌组织的 vWF mRNA 表达情况进行分析，结果如图 3.1E 显示，与正常组织相比，N0 期、N1 期、N2 期患者胃癌组织的 vWF mRNA 表达均升高(P＜0.01)，N3 期患者胃癌组织的 vWFmRNA 表达显著升高(P＜0.001)。
最后，我们使用 Kaplan meier 分析了 vWF 对胃癌患者生存期的影响，结果如图 3.1F.G.H 显示，与低表达 vWF 的胃癌患者相比，高表达 vWF 的胃癌患者的总体生存期（Overall Survival，OS），无进展生存期（First Progression，FP）及进展后生存期（Post Progression Survival，PPS）均降低(P＜0.001)。
四 讨论
1.BGC823 胃癌细胞中 vW F 表达情况
vWF 是血浆中重要的大分子糖蛋白，在多项研究中发现，血浆 vWF 水平在多种肿瘤患者中升高，如胃癌、乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌等，一些研究发现vWF 水平与肿瘤分期及临床预后相关。研究表明结直肠癌患者血浆 vWF 水平与肿瘤分期相关，并可作为判断预后的独立指标[101]，晚期非小细胞肺癌患者血浆vWF 水平与肿瘤的分级分期相关[102]，肝癌患者血浆 vWF 水平与肿瘤临床病理分期相关[103]。胃腺癌患者血浆 vWF 水平明显增高，且 vWF 水平与肿瘤分化程度相关[27]。
为探讨胃癌 vWF 的表达情况，本实验通过生物信息学方法分析了 GSE19826行了生存分析，结果显示高表达 vWF 的胃癌患者的总体生存期、无进展生存期以及进展后生存期均降低，生物信息学结果提示 vWF 与胃癌的进展及预后具有密切关系。本实验室团队前期使用免疫荧光、WB、RT-PCR 等多种实验方式检测到 BGC823 胃癌细胞中 vWF 的表达，但是与内皮细胞相比，BGC823 细胞的vWF 表达较低。为了进一步探讨瘤源性 vWF 对胃癌细胞的影响，我们分别使用含有全长 vWF cD NA 的质粒对 BGC823 细胞进行稳定转染，得到了可以稳定过表达 vWF 的 BGC823-vWF 细胞，用空质粒对 BGC823 细胞进行稳定转染得到BGC823-sham 细胞。
本实验对转染细胞进行了鉴定，荧光显微镜下可见 BGC823-vWF 细胞及BGC823-sham 细胞显示绿色荧光，使用 WB 方法多次检测 BGC823 细胞、BGC823-sham 细 胞 及 BGC823-vWF 细 胞 中 vWF 蛋 白 的 表 达 ， 结 果 提 示BGC823-vWF 细胞可以稳定过表达 vWF，为后期实验奠定了基础。
2.瘤源性 vWF 对肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响
血液循环中的 vWF 主要由内皮细胞合成分泌，当血管内皮受损时，大量血小板围绕 vWF 聚集，在止血中发挥重要作用，由于 vWF 与凝血的密切关系，早期有关 vWF 的研究主要围绕血液系统疾病展开。近年来研究发现 vWF 与肿瘤的发生发展密切相关，目前多数研究主要围绕内皮源性 vWF 介导的细胞粘附及肿瘤血管生成等方面展开，部分实验阐述了内皮源性 vWF 对肿瘤细胞 EMT 及凋亡的影响，如 Ling 等人研究发现内皮细胞释放的 vWF 可以促进骨肉瘤细胞的 EMT以及肿瘤的生长及转移，这个过程与 NF-κB 信号通路的激活有关，且骨肉瘤细胞 EMT 后可以激活 PLD1 并反馈上调内皮细胞 vWF 的表达，形成一个正向反馈闭环[39]。本研究团队前期的实验发现，瘤源性 vWF 可促进 BGC823 胃癌细胞的自聚集以及癌细胞与血小板、内皮细胞的粘附，动物实验进一步发现高表达 vWF的胃癌细胞形成肺转移瘤速度快，肺荷瘤面积大，小鼠存活率低，提示瘤源性vWF 能促进胃癌的生长及转移[27]。本实验进一步探讨了瘤源性 vWF 对肿瘤细胞生物学行为的影响。
首先，本实验对比了 BGC823 细胞、BGC823-sham 细胞及 BGC823-vWF 细胞的增殖能力，结果显示转染了空质粒的 BGC823-sham 细胞增殖能力与 BGC823细胞无明显差异，而高表达 vWF 的 BGC823-vWF 细胞增殖能力明显增强，提示瘤源性 vWF 可能参与调控肿瘤细胞的增殖。进一步我们探讨了 BGC823 细胞、BGC823-sham 细胞及 BGC823-vWF 细胞的迁移及侵袭能力，结果显示转染了空质粒的 BGC823-sham 细胞的迁移及侵袭能力与 BGC823 细胞无明显差异，而高表达 vWF 的 BGC823-vWF 细胞的迁移、侵袭能力显著增强。上述实验提示转染空质粒对 BGC823 细胞的生物学行为无明显影响，而瘤源性 vWF 具有增强胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的作用，且对胃癌细胞侵袭能力的影响最为明显。既往有报道称瘤源性 vWF 具有促进结直肠癌细胞增殖、迁移的能力[42]，与本研究结果一致。
肿瘤的侵袭迁移能力与其分泌的酶类相关，其中最重要的是基质金属蛋白酶类（MMPs），MMPs 中最受关注的是 MMP2、MMP9，因此我们进一步检测了BGC823-vWF 细胞及 BGC823-sham 细胞的 MMP2、MMP9 蛋白表达情况，结果显示，BGC823-vWF 细胞较 BGC823-sham 细胞的 MMP2、MMP9 蛋白表达升高。提示瘤源性 vWF 可能是通过上调 BGC823 胃癌细胞的 MMP2、MMP9 蛋白表达从而增强细胞的侵袭迁移能力。
六展望
vWF 作为机体重要的大分子糖蛋白，与肿瘤的进展密切相关，既往有关内皮源性 vWF 对肿瘤影响的研究出现了两种完全相反的结果，近年来一些研究发现部分肿瘤细胞具有分泌 vWF 的功能，且瘤源性 vWF 可从多个方面影响肿瘤的进展。本实验以 BGC823 胃癌细胞为研究对象，初步研究了瘤源性 vWF 对BGC823 胃癌细胞生物学行为的影响及其可能的分子机制，更全面地认识了不同来源的 vWF 对胃癌细胞的影响，为后续的研究提供了一定的理论基础。机体是一个复杂环境，进一步研究需完善体内实验，在动物模型中验证瘤源性 vWF 对肿瘤发生发展的调控作用及机制，为肿瘤的靶向治疗提供新的研究思路。
参考文献（略）
