医学论文哪里有？本研究首次在若尔盖县微小扇头蜱和森林革蜱中检测到斑点热群立克次体和巴尔通体。其中检出斑点热群立克次体 1 种，即：R. raoultii，在牦牛全血样本种检测到了斑点热群立克次体和无形体，其中斑点热群立克次体 2 种，即：R.raoultii 和 R. felis，无形体 1 种，即：A. capra。
第一章 蜱分类及蜱传病的研究进展
1.蜱分类及生活史
1.1 蜱的概述
世界上大约有 900 种不同的蜱，主要分为三个大科，硬蜱科（Ixodidae）、软蜱科（Argasidae）和纳蜱科（Nuttallielldae）。其中大多数属于两个主要的大科之硬蜱科（Ixodidae）、软蜱科（Argasidae）（Guglielmone et al., 2010）。硬蜱属包括硬蜱属（Ixodes）、花蜱属（Amblyomma）、血蜱属（Haemaphysalis）、革蜱属（Dermacentor）、璃眼蜱属（Hyalomma）、扇头蜱属（Rhipicephalus）、异扇蜱属（Anomalohimalaya）和凹沟蜱属（Bothriocroton）等（Estradaet al., 2015）。软蜱科则包括 5 个属，即耳蜱属（Otobius）、赝蜱属（Nothoaspida）、锐蜱属（Argas）、穴蜱属（Antricola）和钝蜱属（Ornithodoros）。第三个科，纳蜱科，只有一个属，即纳蜱属（Nuttalliella）。蜱在生长过程中可以分为四个发育阶段即卵、若虫、幼虫、成虫。
按蜱的生活史进行分类，可将蜱分为三宿主蜱、双宿主蜱和单宿主蜱。如蜱在若虫、幼虫到成虫这三个阶段分别寄生于三种不同的宿主体表，在每一阶段之间脱落在地面上蜕皮，这一类的蜱称为三宿主蜱；如在若虫和幼虫期间停留在同一宿主体表，成虫则在另一个宿主体表寄生，这一类的蜱称为双宿主蜱；如整个生命周期发生在同一宿主身上，这一类的蜱称为单宿主蜱。在硬蜱中 90%都属于三宿主蜱，雌硬蜱在吸血后就会从他们的宿主体表掉下，在草木中产下成千上万的卵随后死去。雄硬蜱可以不进食，但当它们需要繁殖的时候必须找到一个宿主寄生。软蜱有几个若虫阶段，一般在 2-8 阶段之间，最后一期若虫吸饱血后离开体表，蜕化为成虫。不同于硬蜱的是，软蜱大多都是多宿主蜱且雄性和雌性都会进食，后期软蜱的若虫和成虫只进食几分钟，每次吸饱血后离开宿主，这也是为什么软蜱很少在宿主体表观察到的原因（Apanaskevich et al.,2014）。
第二章 若尔盖县牦牛体表寄生蜱形态学与分子生物学鉴定
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1 蜱虫采集
于 2018 年 3 至 2019 年 8 月，根据若尔盖县各乡镇不同的农业类型（图 2-1），分别选择 2 个纯牧业乡镇和 2 个农业乡镇采集牦牛体表寄生蜱虫（每个乡镇选择 3-4 个村，每个村选择 9-10 户的牦牛群，每头牦牛体表采集 5-6 只，共采集蜱虫（饱血成蜱）632 只。将采集的蜱虫装入收集管，塞入浸湿的脱脂棉，经显微镜观察和形态学分类后放入 75%的酒精溶液中，并置于 4℃冰箱保存待检。
50×TAE 缓冲液配制：电子天平上准确称取 Tris-base 242.0 g 倒于 800 mL去离子水中,再加入醋酸 57.1mL 和 0.5 mol/L 的 EDTA（pH 8.0）100 mL，混匀后，加去离子水定容至 1 L，静置过夜后方可稀释为 1×TAE 溶液，于常温下保存。
1×TAE 溶液：取 20 mL 上述 50×TAE 缓冲液于溶液瓶，再量取 980mL 去离子水，然后混匀。
1.2%琼脂糖凝胶：称取 1.2g 琼脂糖加入锥形瓶中，再用量筒取 100mL1×TAE 溶液至锥形瓶，轻轻摇晃混匀，用电热炉加热至沸腾使琼脂糖完全溶解，放置至 80℃左右时再加入 6-8μL 的核酸染料（Goldenview），混匀后倒入制胶槽中，室温冷却半小时左右即可成胶。
第三章 若尔盖县牦牛及牦牛源蜱传斑点热群立克次体、巴尔通体与无形体的分子检测
1.材料与方法
1.1 材料
蜱虫采集见第 2 章 1.1。每个乡镇每村选择 9-11 户的牦牛，每户采集牦牛全血 5-6 份，共采集到牦牛全血 104 份。
1.2 方法
1.2.1 虫体组织 DNA 提取
见第 2 章 1.2.2.1。1.2.2 牦牛全血 DNA 提取将每管牦牛全血样品吸取 100μL 于干净 EP 管中分别对应标记，待用。用EasyPure Blood Genomic DNA Kit 按照说明书提取组织 DNA。
1.2.3 PCR 引物的选择
根据文献检索采用 Caroline 建立的方法检测巴尔通体 gltA 基因（Reis et a1.,2011），再将 gltA 基因检测的阳性样本采用 Black 等建立的巢式 PCR 方法检测rpoB 基因（Black et a1., 1994）。无形体采用 Du-Gyeong Han 报道的巢式 PCR方法进行检测（Han et a1., 2018），先将 EE1 和 EE2 作为第一对引物，再以第一轮的产物作为模板，以 EE3 和 EE4 作为第二对引物进行扩增。SFGR 采用ompB 基因和 gltA 基因巢氏 PCR 的方法检测（Isabel Get al., 2018）。伯氏疏端螺旋体采用 Tian ZC 等报道的方法，以 16SrRNA 为靶基因，检测伯氏疏端螺旋体病原(Tian et al., 2011)。所有扩增均设阳性对照（本实验室保存）和阴性对照（去离子水）。引物信息见表 3-1。
2.结果
2.1 蜱传病原基因扩增结果
经 PCR 扩增后，经 1.2%琼脂糖凝胶电泳，蜱和牦牛血斑点热群立克次体ompB 在 618bp 左右出现条带，gltA 基因只在蜱样本出现阳性条带，约 338bp左右。巴尔通体 gltA 基因和 rpoB 基因分别在 379bp 和 380bp 左右出现条带，牦牛全血未检出阳性样本；无形体 16S rR NA 基因在 426bp 处出现条带，蜱组织样本未检出阳性条带。基因扩增结果与预期大小相符（图 3-1~3-6）。
全文结论
1.本研究经形态学和分子生物学鉴定出若尔盖县至少存在 2 种蜱，即微小扇头蜱和森林革蜱，其中微小扇头蜱为优势种（75.8%），这 2 种蜱在四个调查点中均有分布。
2.首次在若尔盖县微小扇头蜱和森林革蜱中检测到斑点热群立克次体和巴尔通体。其中检出斑点热群立克次体 1 种，即：R. raoultii，在牦牛全血样本种检测到了斑点热群立克次体和无形体，其中斑点热群立克次体 2 种，即：R.raoultii 和 R. felis，无形体 1 种，即：A. capra。
3.蜱中两种病原的阳性率为：斑点热群立克次体 23.4%，巴尔通体 3.0%。牦牛血中两种病原的阳性率为：斑点热群立克次体 13.5%，无形体 13.5%。
4.若尔盖县四个调查点的蜱中存在巴尔通体与斑点热群立克次体的混合感染，混合感染率为 2.2%；牦牛存在混合感染斑点热群立克次体和无形体的混合感染，混合感染率为 5.8%。
参考文献（略）
