医学论文哪里有？本文通过 HPLC-MS 对千里光黄酮液成分分析，得知千里光中有芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素等 4 种主要的黄酮化合物和少量的酚酸化合物，如：绿原酸、阿魏酸等物质，进一步将这几种成分在 F2 群体中含量与千里光抗菌性进行 Pearson 相关系数分析，发现紫云英苷与志贺杆菌、槲皮素与金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、阿魏酸与金黄色葡萄球菌他们之间有显著相关性。
1 材料、试剂与仪器
1.2 方法
1.2.1 材料的扦插
选取生长势良好、无损伤、无病虫害的千里光植株，插穗为 2~3 节的无叶茎段，长度约 10 ± 2 cm，其生长前端的腋芽利用 600 mg/L NAA 处理 2 h，无菌水清洗后扦插于 5%的 KMnO4溶液消毒后的河沙中，置于 22~25°C、相对湿度85 ± 5%的温室，日常管理用 1/2 MS 液体培养基浇灌以保持表层土壤湿润。30 d后取出扦插株，并用去离子水将根洗净后置于 1/2 MS 液体培养基中继续培养。
1.2.2 取材与固定
待根继续延伸至 2~3 cm 时，剪取长度约 0.5 cm 根尖于冰水混合物，预处理 15 h 后，转入新配置的卡诺固定液固定 24 ~ 48 h。
1.2.3 酶解
将固定后的试验材料置于 0.075 mol/L KCL 溶液前低渗处理 30 min 后，用去离子水冲洗 3 ~ 5 遍，于 37℃恒温环境下，用 2.5%果胶酶和 2.5%纤维素酶混合液（pH=5.5，由 PBS 溶解）处理 60 ~ 90 min 之后，用去离子水低渗处理 40 ~ 60 min，备用。
1.2.4 制片与染色
将试验材料置于预冷的载玻片上，滴加少量双蒸水以保持根尖处于液体环境，用解剖针压平根尖（长度为 2 ~ 4 mm），滴加适量卡诺氏固定液，晾干，滴加 0.1 µg/mL 苯酚品红染液，染色 20 min 以上，盖上盖玻片后用滤纸吸去多余染液，轻敲盖玻片、压片。
3 结果
3.1 千里光黄酮化合物 HPLC 分离优化体系
黄酮化合物是千里光重要次生代谢产物之一，据相关文献报道，黄酮化合物最佳检测波长为 365 nm，在此条件下，以 P-SC-32 黄酮液和 P-SC-35 黄酮液为检测对象，在优化前色谱洗脱条件下（图 A），可以看出 2 个样品黄酮化合物成分种类丰富，虽然可见吸收峰，但是样品分离时间在 20 min 以内就已经结束，对成分的分离程度不充分；在更换色谱柱 Dubhe C18 (150 mm×4.6 mm，5 µm)，B 通道的有机相换成乙腈，然后不断调整洗脱程序，得出优化后的 HPLC条件（图 B），在图 B 中 P-SC-32 黄酮液和 P-SC-35 黄酮液的分离时间延长至45 min，各个成分的色谱峰分离程度更大，且基线平稳，故以优化后的 HPLC条件作为 F2 千里光群体黄酮化合物成分的检测条件。
3.2 千里光黄酮液化合物成分鉴定
以 P-SC-32 黄酮液为样品，在质谱条件下鉴定千里光黄酮化合物后成分，然后将鉴定成分对比到目前已报道的黄酮成分数据库中，检测结果为：
4 讨论
黄酮化合物是中药材中具有重要生物活性的一类化合物，也是千里光重要的次生代谢产物之一，本研究鉴定黄酮化合物成分后以芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素作为研究对象，这几种成分在国内外文献中，对其抗菌作用已有相关报道，例如：Motallebi[53]等人研究了芦丁与抗菌光动力联用时对铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌光动力灭活的影响，研究结果表明，芦丁与抗菌光动力联用时，这两种细菌数量和生物被膜的产量都有大幅度下降；此外，纪晓花[54]通过滤纸圆片法测定荷叶中紫云英苷对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉等细菌、霉菌的抑菌圈直径，实验结果表明紫云英苷对细菌、霉菌的抑菌圈直径较大，抑制作用均较强，同时也表明了紫云英苷对多种细菌的抗菌谱宽。在本实验中，也选取少量酚酸类成分作为研究对象，有绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等，Kepa M[55]等人通过最低抑菌浓度值的方法，得出咖啡酸对金黄色葡萄球菌的 MIC 值是为 512 μg/mL，表明咖啡酸对金黄色葡萄球菌有抗菌作用；Kabir F[56]等研究者通过紫外分光光度计联合琼脂平板细菌计数法，记录大肠杆菌的 OD 值，也证实了阿魏酸对大肠杆菌具有抑制作用；在国外的研究中也发现，绿原酸对志贺杆菌和肺炎链球菌也有显著的抑制作用[57-58]；
为使目标化合物得到充分的有效分离，本研究对 HPLC 检测条件进行了优化，研究结果发现，在检测波长是 360 nm 时，大部分黄酮化合物成分吸收峰值高，峰形好，因此，在确定检测波长后我们对色谱柱、流动相、洗脱条件、流速的条件进行了优化；在前期条件优化摸索中，发现色谱柱型号是 Dubhe C18 (150 mm×4.6 mm，5 µm)时，吸收信号较 Dubhe C18 (250 mm×4.6 mm，5 µm)提升，色谱峰峰形也较 Dubhe C18 (250 mm×4.6 mm，5 µm)更好，因此选用色谱柱Dubhe C18 (150 mm×4.6 mm，5 µm)对目标化合物分离；在流动相的选择上，我们考察了 0.2%冰乙酸-甲醇和 0.2%冰乙酸-乙腈两种体系，结果显示：在 0.2%冰乙酸-甲醇体系中，DA 吸收峰响应值异常增高，液相色谱仪机器提示色谱柱压也异常增高，那么在水相不变的情况下，将有机相更换为乙腈时，色谱柱压及 DA 吸收峰回归正常，峰形对称，且基线平稳，故以 0.2%冰乙酸-乙腈流动相作为千里光黄酮液的分离体系。对目标化合物分离时采用等梯度洗脱，在色谱图中（图 3-1，A）发现：虽然目标成分在短时间内就分离结束，但是每一个目标成分均得不到有效分离，故重新采用梯度洗脱程序，在梯度洗脱程序优化后的色谱图中（图 3-1，B），可以发现目标成分得到有效分离，所以优化后的HPLC 条件，黄酮成分分离程度可以最大化，对于含量的计算也减少了实验误差。
5 结论
通过 HPLC-MS 对千里光黄酮液成分分析，得知千里光中有芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素等 4 种主要的黄酮化合物和少量的酚酸化合物，如：绿原酸、阿魏酸等物质，进一步将这几种成分在 F2 群体中含量与千里光抗菌性进行 Pearson 相关系数分析，发现紫云英苷与志贺杆菌、槲皮素与金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、阿魏酸与金黄色葡萄球菌他们之间有显著相关性。基于此，我们得知，在千里光的抗菌机制的研究中，紫云英苷、槲皮素、阿魏酸与千里光抗菌作用有显著相关性。
参考文献（略）
