医学论文哪里有？本课题聚焦 B7-H3 和 PYCR1 的预后价值及其对 CRC 发生发展的作用，收集 CRC患者组织样本，探索 B7-H3 和 PYCR1 的表达相关性和预后意义；同时构建了稳转株和瞬转株，研究 B7-H3 和 PYCR1 在 CRC 细胞中的调控关系以及对肿瘤表型的作用。
第一章 绪论
1.2 B7-H3 的结构、分布以及在肿瘤中的研究进展
1.2.1 B7-H3 的结构和分布
B7-H3 是由 Chapoval 等于 2001 年在人类树突状细胞的 cD NA 文库中发现的 B7 家族的新成员，因其在氨基酸序列上与 B7 家族其他成员的胞外域受体结合区有20%~27%的同源性且结构相似，所以被命名为 B7 Homolog 3（B7-H3）[27]。成熟的B7-H3 分子是一个编码大小为 316 个氨基酸的 I 型跨膜蛋白，包含 N 端的一个信号肽，一个具有细胞外的免疫球蛋白样可变区（IgV）和恒定区（IgC）、一个跨膜区和一个含有 45 个氨基酸的胞内区[28]。人体的 B7-H3 主要存在 2 种剪切体：胞外区由IgV-Ig C 组成的 B7-H3a (2Ig-B7-H3)和胞外区由 IgV-IgC-IgV-IgC 组成的 B7-H3b (4Ig -B7-H3)。小鼠的 B7-H3 分子只有 2Ig-B7-H3 结构域，而人类以 4Ig-B7-H3 亚型表达为主[29]，此外人体中 B7-H3 除了表达在细胞膜上，还存在可溶性形式，可溶性 B7-H3分子主要存在于正常人外周血中，可能参与多种生物功能，但具体的调控机制及临床意义还有待探讨[28, 30]。
B7-H3 mRNA 广泛表达于几乎人类所有的免疫及非免疫组织器官，包括脾脏，胸腺、心脏、肝脏、前列腺、胎盘、睾丸、胰腺、小肠和大肠等，有趣的是，B7-H3 mRNA 在正常组织和细胞中表达水平较低，但在多种肿瘤组织和肿瘤细胞株中表达较高。相较于 B7-H3 mRNA 的广泛表达，B7-H3 在蛋白水平仅表达于少数正常组织如人体前列腺、乳房、肝、肺、膀胱、胎盘等，B7-H3 在转录水平和蛋白水平上的表达差异可能与转录后调控有关，然而具体的转录后调控机制目前仍不明确[31-33]。学者们推测，机体内可能存在某种机制抑制了 B7-H3 在机体正常组织中的表达，而 B7-H3 的异位表达可能是肿瘤免疫的机制之一。
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第三章 B7-H3 对 PYCR1 表达的调控和其在结直肠癌脯氨酸代谢中的作用探讨
3.1 实验材料
3.1.1 细胞株
细胞株
（1）DMEM 完全培养基：配制血清浓度 10%的完全培养基：450ml DMEM 细胞培养基+50ml 胎牛血清+5ml 链霉素+5ml 青霉素；
（2）细胞冻存液：胎牛血清、DMEM 培养基和 10% DMSO 的比例为 5:4:1；
（3）1x PBS：取 10x PBS,用双蒸水稀释 10 倍后置于容量瓶中，高温灭菌用于细胞实验；
（4）10% APS：在电子天平上称重 0.1g 晶体,溶于 1ml 双蒸水中,并搅拌混匀；
（5）10x running buffer：分别称取 Tris 30g，SDS 10g,glycine 144g， 加双蒸水定容至 1L，并搅拌混匀；
（6）1 x running buffer：量取 10x running buffer 100ml 于烧杯中，倒入 900ml 的双蒸水，并搅拌混匀
（7）10 x trans buffer: 分别称取 Tris 30g 和 glycine 144g，溶于 1l 双蒸水中，搅拌混匀； （8）10 x TBS：分别称取 Tris 24.2g 和 NaCl 80g，溶于 1l 双蒸水中，搅拌混匀；
（9）1 x TBS：量取 10x TBS 100ml 于烧杯中，倒入 900ml 的双蒸水，并混匀；
（10）1 x TBST：取 500ml 配置好的 1x TBS，吸取 1ml 吐温溶于 TBS 中，吹打混匀；
（11）转膜液：纯水、无水乙醇和 10x trans buffer 溶液的配置比例为 7:2:1，搅拌混匀；
（12）5%牛奶：称取 2.5g 奶粉倒入装有 50ml 1x TBST 的抗体盒中，将抗体盒置于摇床上，充分混匀；
（13）10%SDS：称取 1g SDS 粉末，倒入 10ml 双蒸水中。
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第四章 B7-H3 与 PYCR1 表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用研究
4.1 实验材料
实验所使用的细胞株为：
实验所使用的细胞株
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4.2 实验方法
4.2.1 CCK-8（Cell Counting Kit-8）测细胞增殖
（1）细胞计数：培养肠癌细胞，待细胞密度达到 70%-90%时，在超净工作台中，用胰酶试剂消化贴壁的细胞，吸取细胞悬浮液至 1.5ml 管中，速度 1000 rpm/min 离心 5 min，得到细胞沉淀。加入 1ml 的完全培养基，用移液枪将细胞吹匀打散得到细胞悬液。拿出细胞计数板，用 PBS 将细胞悬液稀释 10 倍，再滴加于细胞计数板上，显微镜下对细胞进行计数；
（2）准备无菌 96 孔板，每孔接种 1500 个细胞，每株细胞设置 5×6 个复孔，共测量 5 天。按照计数结果吸取细胞悬液置于 96 孔板中，不足 100ul 悬液的孔，用完全培养基补充至 100ul，加样结束后，将 96 孔板放置于细胞培养箱继续培养。注意全程无菌操作，并做好样品标记；
（3）次日，镜下观察细胞状态后，从 4℃冰箱中取出 CCK-8 试剂，用无血清培养基配制 10% CCK-8 溶液，并混合均匀。用微型台式真空泵吸弃 6 个孔中的细胞培养液，每孔加入 100µƖ 的 10% CCK-8 溶液，同时设置 3 个空白孔，空白孔中同样加入10 % CCK-8 溶液。加样结束后，将孔板放入培养箱孵育 1.5h；
（4）打开酶标仪，从培养箱中取出 96 孔板，在 450 nm 处进行测量，测量完成后导出实验数据，并将 96 孔板放回培养箱继续培养；
（5）其余四天的检测方法和测量时间与第一天一样，将每一天的实验数据进行保存。
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第五章 结论与展望
5.1 主要结论
本课题聚焦 B7-H3 和 PYCR1 的预后价值及其对 CRC 发生发展的作用，收集 CRC患者组织样本，探索 B7-H3 和 PYCR1 的表达相关性和预后意义；同时构建了稳转株和瞬转株，研究 B7-H3 和 PYCR1 在 CRC 细胞中的调控关系以及对肿瘤表型的作用，现将主要结论陈述如下：
（1） 在 CRC 患者组织中，B7-H3 和 PYCR1 表达显著升高且具有表达相关性，B7-H3 和 PYCR1 高表达预示了患者更差的生存。
（2） 在 CRC 细胞中，B7-H3 可以通过激活 PI3K 信号通路调控 PYCR1 的表达。
（3） 在 CRC 细胞中，B7-H3 可以通过调控 PYCR1 来影响肿瘤的脯氨酸代谢。
（4） B7-H3 可以调控 PYCR1 促进 CRC 细胞的增殖、侵袭和迁移能力。
参考文献（略）
