本文是一篇医学论文，医学，是通过科学或技术的手段处理人体的各种疾病或病变的学科。它是生物学的应用学科，分基础医学、临床医学。从解剖层面和分子遗传层面来处理人体疾病的高级科学。它是一个从预防到治疗疾病的系统学科，研究领域大方向包括基础医学、临床医学、法医学、检验医学、预防医学、保健医学、康复医学等。（以上内容来自百度百科）今天为大家推荐一篇医学论文，供大家参考。
引言
胃食管反流病（gastroesophageal reflux disease，GERD）是一种慢性疾病，通常由胃酸反流到远端食管引起的。GERD 的主要症状包括反酸、烧心和非心脏性胸痛[1]。GERD 是一种常见的消化疾病，其直接医疗费用每年约为 93 亿美元，并且会导致生活质量下降[2,3]。在西方国家，GERD 的患病率很高[4,5]，特别是在美国，大约有 44%的美国人每月至少有出现一次 GERD 症状，17%的人每周出现一次，而 7%的人每天会出现一次[6,7]。GERD 在亚洲人中并不常见[8]。然而，据报道，在亚洲，GERD 的流行率正在上升[9,10]。日本成年人口的总体中患病率约占 16%[11]。在台湾，对上消化道症状进行评估，发现有 15%的患者，在韩国，这一比例约为 10.5%[9,12]。在中国，目前很少有关于 GERD 的流行病学数据。1999年，一项中国研究报告称，在北京和上海，中国最大的两个城市—北京和上海的患病率是 5.77%[13]。尽管 GERD 在中国的流行比西方国家和其他亚洲国家要少，但最近的研究显示，在中国，GERD 的发病率正在上升[3]。反流性食管炎（refluxesophagitis，RE）是最常见的 GERD 表现类型之一[14]。研究发现，胃内容物的反流尤其是胃酸的反流被认为是造成 RE 发生的主要原因，影响这一现象产生的因素有多种，通过对性别研究发现，男性相对于女性而言更容易发生 RE；年龄也是反流性食管炎发生的一个重要因素，随着年龄的增加，RE 的患病率也会随之增加；身体质量指数（Body Mass Index，BMI）的增加也与 RE 的发生有密切联系；除此之外，酗酒和抽烟也会影响 RE 的发生[15-18]。RE 在临床上的症状主要表现在四个方面，其一是反流的症状，主要表现在饮食后，常常出现反胃、反酸以及嗳气等症状，并且在身体前倾或者平躺时更易出现上述症状；其二是食管内部受到刺激的症状，当食管受到刺激后，常会出现胸部疼痛，吞咽难度增大，并且在饮食后的 1 小时内还会出现烧心症状，当腹部压力升高时会加剧；其三是食管外部受到刺激的症状，通过研究发现食管外部的刺激会使患者产生哮喘、咳嗽以及咽喉炎症，数据研究显示，对患有咽喉炎的 34 例患者的食管的 PH 进行测定，发现 67.7%的患者中患有反流性食管炎[19]，张等[20]也发现，在慢性咽喉炎的患者中，同时患有 GERD 的患者超过30%，GERD 的发生可能与哮喘的发生有密切联系[21]；除此之外，反流性食管炎还伴有一系列并发症，如食管狭窄、Barrett 食管以及食管腺癌等。RE 还与炎性细胞的浸润和食管粘膜膜上皮细胞中白细胞介素（interleukin，IL）的表达水平有关[22]。
目前对于 RE 的治疗在不断进步和创新，主要的治疗方式有生活方式的改变、药物治疗以及介入治疗。良好的饮食和生活方式对 RE 的治疗非常重要，甚至是在康复后期，保持良好的生活习惯有助于患者的恢复，对于 RE 患者，在睡眠时可将床头抬高，并且在日常活动中要尽量避免弯腰和身体前倾，除此之外，饮食习惯也尤为重要，要注意控制饮食切忌暴饮暴食，饮食最好要定时定量，并且在睡前 3 小时前不要饮食，良好生活习惯的保持，能够减少药物使用的剂量，减少治疗时间，增强治疗效果[23-25]。药物治疗主要是针对 RE 产生的症状，常用的药物有胃酸抑制剂类药物、胃动力促进剂类药物以及胃粘膜保护剂类药物。胃酸在 RE 的发病机制中发挥关键的作用，在治疗该病的过程中，PH 值的控制是非常重要的，常见的胃酸抑制剂类药物有质子泵抑制剂（Proton pump inhibitor，PPI）和 H2 受体拮抗剂（H2-receptor antagonist，H2RA），PPI 类药物被广泛应用于治疗反流性食管炎中，PPI 类药物种类也比较多，研究发现，糜烂性食管炎患者服用 40 mg 埃索美拉唑后的 4 周和 8 周内，糜烂性食管炎患者的愈合率分别高达 81%和 96%[26]。而 H2RA 类药物的抑制酸的能力要弱于 PPI 类，一般用于治疗轻度或者中度的患者，除此之外还发现 H3 受体拮抗剂（H3-receptor antagonist，H3RA）、胃泌素受体拮抗剂以及释放肽受体拮抗剂都能够起到抑制胃酸的效果[27]。这一类药物的作用机制是降低胃内容物反流时带来的刺激，并没有从根本上解决胃内容物的反流问题，当患者停止药物后，往往会复发，但是长期服用该类药物一方面会给患者带来经济压力，另一方面还会产生一系列的副作用，如头痛、消化不良、腕关节发生骨折以及腹泻等[28]。胃动力促进类药物的作用机制主要是提高食管下端括约肌（Lower esophageal sphincter，LES）的压力，增强食管的蠕动，并且加快胃中内容物的排空，从而减少胃内容物进行反流，该药物主要用于患有胃排空障碍的患者，也可以作为 PPI 类药物的一种辅助药物，但是其治疗效果并不是很明显，因此一般可用于针对普通药物较难治疗的患者[29]。胃粘膜保护剂类药物是对受损的粘膜起保护性作用，也可以中和胃酸，从而降低胃酸对粘膜的损伤，在利用胃抑制剂类药物和胃动力促进剂类药物后没有得到明显改善后，可用胃粘膜保护剂类药物进行治疗[30,31]。瑞巴派特是一种能刺激前列腺素和粘液糖蛋白合成的药物，它能够抑制活性氧、炎症细胞因子和趋化因子的分泌并且还能够抑制白细胞的活动，它被认为是对抗炎症过程中一种具有代表性的防御药物。除此之外，部分的反流性食管炎患者还患有胃炎，而瑞巴派特也是一种胃炎的有效治疗剂，在慢性胃炎患者中，瑞巴派特能够在胃炎的治疗上有一定效果，并且能够明显改善慢性胃炎患者的内镜和组织学参数[32-34]。
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第一部分 HCl 对食管鳞状细胞 Het-1A 及 miR-133b 表达影响
1.1 前言
反流性食管炎（Reflux Esophagitis，RE）是胃食管反流病（Gastroesophagealreflux disease，GERD）中的一种，是指胃或者十二指肠中的内容物反流到食管中，而内容物中的酸性物质会造成食管粘膜发生炎症甚至发生癌变。常见的类型有两种，一种是酸性物质反流造成的食管炎，另一种是碱性物质反流造成的食管炎。该病在临床上的症状多样，轻重程度不同，表现也不同，主要的症状有反胃、反酸、胸痛、烧心等，除此之外，食管粘膜会出现损伤[52-54]。调查显示，正常人也会产生胃反流现象，但一般没有疾病的症状，反流性食管炎是一种常见的消化系统疾病，并且在各个年龄段都可能发生，但是会随着年龄的增加发病率也会随之增高，在老年人中的发病率是最高的，老年人中60 岁以上的患者占 40%以上[55,56]。研究发现，反流性食管炎主要是由于胃中食物反流造成的食管粘膜损伤，发生损伤的主要原因是保护和损伤作用失去平衡。食管下括约肌、横膈膜以及粘膜活瓣都能够防止胃液发生反流，当这些功能受损时，也会诱导胃内容物发生反流。除保护作用外，还有一些损伤因素也能诱导疾病的发生，如吸烟会使食管下括约肌压力（lower esophageal sphincterpressure，LESP）降低，使得胃和食管中的保护屏障受损，增加胃中内容物的反流次数[57]，胃排空障碍也与胃反流有关，当胃的体积增大后，使得 LESP 下降，使得胃酸分泌和反流次数增加，胃液在发生反流时，胃液中的酸性物质会对食管粘膜造成损伤[58-60]。
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1.2 结果
为检测 HCl对 Het-1A细胞的影响，将细胞分别在 PH 4.0中培养 0 min、5 min、15 min 以及 30 min 后发现，随着培养时间的增加，细胞的活力也随之下降，当培养到 30 min 后，细胞活力显著下降（P< 0.05），结果如图 1.1A；为进一步研究 HCl 影响细胞活力的机制，对培养 30 min 后，细胞中 miR-133b 的表达水平进行测定，结果表明，与对照组相比，在 HCl 中培养 30 min 的细胞中 miR-133b的表达水平出现明显上调（P< 0.001），通过本实验我们推测 HCl 能够降低 Het-1A细胞的活力，并且 miR-133b 可能与细胞活力的降低有关。
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第三部分 miR-133b 对 ERK 和 PI3K/AKT 信号通路的影响....30
3.1 前言..............30
3.2 材料与方法...............31
3.2.1 实验所用试剂耗材.........31
3.2.2 实验所用仪器 ..............32
3.2.3 实验所用溶液的配制 ...........33
3.2.4 细胞培养........... 34
3.2.5 细胞转染........... 34
3.2.6 细胞分组与处理 ........... 35
3.2.7 蛋白样品提取及含量测定......... 35
3.2.8 Western blot 检测........... 36
3.2.9 数据统计........ ...37
3.3 结果.............38
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3.3.1 miR-133b 对 Het-1A 细胞中 ERK 和 PI3K/AKT 信号通路的影响..............38
3.4 讨论.............39
结论........ 41
3.4 讨论
目前研究认为，肿瘤的形成是由于体细胞内致癌基因和抑癌基因发生突变并不断累积，并且进一步控制细胞的生长、存活和移动。在调控肿瘤形成中细胞的多种功能的信号通路中，MAPK 信号通路显得尤为重要，MAPK 信号通路是一种关键的细胞内信号传导途径，它能调节细胞的多种功能，如细胞的存活、迁移、增殖和细胞周期的调控、血管生成。MAPK 级联反应通过激活细胞表面的受体酪氨酸激酶，包括表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR），并与特定的生长因子结合，在细胞核中完成 ERK1/2 的磷酸化，在未激活的情况下，细胞质中会存在 ERK，这是因为 ERK 与胞质锚能发生相互作用，一旦 ERK 发生磷酸化，ERK 就会迅速重新定位到细胞核中，激活 EIK-1，c-jun 转录因子，而这些转录因子与细胞增殖和存活的相关基因的表达有关。然而，ERK 在细胞核外的作用也非常重要，如细胞的粘附、高尔基体的分裂以及抗凋亡信号传导等过程都依赖于 ERK[148,149]。在人类多种肿瘤中，如：黑色素瘤、神经胶质瘤、膀胱癌和子宫内膜癌中都有发现 p-ERK 的蛋白表达水平升高[150-153]。ERK1/2 能够促进细胞的增殖，除此之外，ERK1/2 在上皮细胞分化过程中也发挥重要的作用，ERK1/2 信号通路在细胞增殖和分化中发挥的作用部分取决于信号的持续时间以及细胞的类型，如在 PC12 嗜铬细胞和大鼠肠道上皮细胞中发现，长期 ERK1/2的激活会阻止细胞的分化和生长，然而在 NIH 3T3 纤维母细胞中，持续的 ERK1/2 信号通路却促进细胞的增殖和转化[154-156]，在 HT29 结肠癌细胞中，ERK1/2 的激活能够阻止细胞分化成类似于 Barett 食管的肠型和杯状细胞[157-159]。Rhonda 等[79,160]通过实验发现，在 Barrett 恶性腺瘤细胞 SEG-1 中，用酸处理细胞发现细胞中 ERK1/2 的表达水平会显著增高，进一步研究发现，在只患有 GERD 的患者中 ERK1/2 的磷酸化水平要比患有 GERD 和 Barrett 食管的患者表达水平要低，并且在患有 GERD 但是没有 Barett食管的患者中，通过酸灌注能够显著增加食管鳞状上皮细胞中 ERK1/2 的活力和磷酸化水平。对反流性食管炎的发病机理进行研究发现，食管上皮细胞中紧密连接（tightjunction，TJ）蛋白的改变与反流性食管炎的发生有关，并且推测 ERK1/2 信号通路可能在调节 TJ 蛋白和食管上皮 TJ 屏障方面起着至关重要的作用。还有研究发现 ERK1/2能够影响 TJ 蛋白在转录水平的表达，ERK1/2 信号通路的激活导致 ERK1 下游相关蛋白的激活，ERK1 的磷酸化对转录调控发挥重要作用。Tan 等[161]通过研究发现，ERK1/2在食管中的磷酸化水平与 TJ 蛋白的表达上调是同步的。
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结论
本论文主要研究 miR-133b 在 HCl 诱导的食道鳞状细胞 Het-1A 损伤中的作用，通过三个方面的研究，我们可以得出以下结论：1.HCl 能够降低食道鳞状细胞 Het-1A 的活力并且能够显著上调细胞中 miR-133b的表达水平；2.miR-133b 的表达水平下调能够增强细胞的活力，降低细胞凋亡水平和凋亡相关因子的表达，反之，当 miR-133b 的表达水平上调，又会降低细胞的活力，增强细胞的凋亡和凋亡相关因子的表达；3.miR-133b mimic 与 HCl 都能够抑制 p-ERK1/2、p-AKT 和 p-PI3K 的表达，而miR-133b inhibitor 能够减轻 miR-133b mimic 的这种作用。本实验中，利用 HCl 成功构建了食道鳞状细胞损伤模型，并且发现 miR-133b 的表达出现异常，进一步研究发现，miR-133b 可能是 Het-1A 细胞活力和凋亡的一个关键的调节因子，miR-133b 的表达下调可能通过上调 ERK 和 AKT/PI3K 信号通路的活性来减轻 HCl 诱导带来的细胞损伤，这也为我们深入研究 miR-133b 在 Het-1A 细胞中的作用机制奠定了基础，也为我们治疗反流性食管炎提供了新的方向。
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参考文献（略）
