药学论文哪里有？本文初步的试验结果表明，碱柴胡具有体外抗炎活性，且主要含原生皂苷的碱柴胡1，其醇提物及水提物的抗炎活性明显优于生品柴胡，而主要含次生皂苷的碱柴胡2，其醇提物及水提物的抗炎活性略优于生品柴胡。提示碱法炮制柴胡可有效提高柴胡药材的抗炎活性。
第一部分碱柴胡炮制工艺研究
1.3药材
柴胡药材：河北省承德市围场县棋盘山栽培柴胡（Bupleurum fromWeichang country,WCB）；承德市滦平县野生柴胡（Bupleurum fromLuanping country,LPB）；承德市丰宁满族自治县野生柴胡（Bupleurumfrom Fengning country,FNB），本实验所用柴胡经河北省承德医学院赵春颖教授鉴定为伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）的干燥根。
2方法
2.1碱法炮制对柴胡中柴胡皂苷类成分含量的影响
2.1.1炮制方法
分别取WCB、LPB、FNB药材净制后，覆盖湿纱布浸润软化8 h，切制成0.5~1 cm小段，鼓风干燥箱60°C干燥。待药材表面水分干燥后，加入不同浓度的碳酸氢钠液体辅料（药材与辅料的质量比分别为:100:2、100:4、100:6），搅拌均匀，浸润，置于炒锅中，用电陶炉文火（120~150°C）翻炒至药材颜色加深、炒干，出锅后摊晾，分别得碱制围场县柴胡（JWCB-1、JWCB-2和JWCB-3）、碱制滦平县柴胡（JLPB-1、JLPB-2和JLPB-3）和碱制丰宁县柴胡（JFNB-1、JFNB-2和JFNB-3）等9种供试品备用。
2.1.2供试品溶液的制备
醇提法：精密称取供试品粉末0.5 g（过4号筛），置于100 mL 锥形瓶中，加入含5％浓氨试剂的甲醇溶液25 mL ，密封，30℃水温超声处理（功率200 W，频率40 kH z）30 min，抽滤，用20 mL 甲醇分2次清洗容器及药物残渣，合并洗液，旋转蒸干。残渣加甲醇溶液转移至5 mL 容量瓶至刻度，摇匀，即得。
水提法：精密称取供试品粉末1 g（过4号筛），置于100 ml锥形瓶中，加入50 ml水摇匀，浸泡1 min，99℃水浴加热10 min，抽滤，用50 ml蒸馏水洗净残渣，抽滤，合并滤液。旋转蒸干后，加甲醇转移至5ml容量瓶至刻度，即得。
讨论
1.细胞培养皿中的完全培养基需每天更换。细胞换液两次后，需进行细胞传代，否则会导致细胞分化。
2.细胞培养过程中，若细胞密度过大，细胞形态会轻微变圆或聚集。
3.RAW264.7细胞传代时，尽量避免用胰酶消化（胰酶会使细胞分化）。若细胞吸附性太强导致细胞难以吹打下来，应加入少量含0.25％EDTA胰酶（仅覆盖培养皿底部），置于培养箱中消化，消化时间不宜超过1min。
4.血清质量差会导致细胞分化，在细胞培养和细胞冻存时应选用高质量胎牛血清。
5.HPLC含量测定结果表明碱柴胡1醇提物中的柴胡原生皂苷含量最高，碱柴胡2醇提物中的柴胡次生皂苷含量最高。细胞体外抗炎活性试验结果表明碱柴胡1和碱柴胡2的醇提物和水提物均有抗炎活性，且抗炎活性均优于生品柴胡。其中碱柴胡1的抗炎活性优于碱柴胡2。综上可以看出，柴胡经碱法炮制后柴胡原生皂苷与柴胡次生皂苷含量增加，其抗炎活性增强，柴胡原生皂苷与柴胡次生皂苷均有抗炎活性，但柴胡原生皂苷抗炎活性最强，是柴胡主要的抗炎活性成分。
结果
1供试药物中柴胡皂苷的含量检测
测定结果见附表1，HPLC结果图见附图1。由附表1可知，供试药物经无血清培养基稀释至生药量200μg/ml后，主要含皂苷类成分SSc、SSa和SSd，其含量分别为20.33 mg/g、85.27 mg/g和109.87mg/g。
2细胞上清液样品中柴胡皂苷含量检测
测定结果见附表2，HPLC结果图见附图2。由附表2知，24 h的药物处理后，细胞上清液样品中主要含皂苷类成分SSc、SSa和SSd，其含量分别为9.60 mg/g、59.20 mg/g和49.93 mg/g。
3 PBS缓冲液样品中柴胡皂苷含量检测
测定结果见附图3，HPLC未检测到相关柴胡皂苷类成分。
4 D-Hanks缓冲液样品中柴胡皂苷含量检测
测定结果见附表3，HPLC结果图见附图4。D-Hanks缓冲液样品中主要含皂苷类成分SSa和SSd，其含量分别为18.73 mg/g和55.27mg/g。
结论
1.碱法炮制可以提高柴胡药材中柴胡皂苷的含量，且碱柴胡中柴胡原生皂苷的含量与柴胡次生皂苷的含量均与炮制过程中辅料用量有关：辅料用量增加时，碱柴胡中柴胡原生皂苷含量升高；辅料用量减少时，碱柴胡中柴胡次生皂苷含量升高。以柴胡皂苷a和d的含量为评价指标，碱法炮制对围场县柴胡的原生皂苷含量提高最多。
2.根据正交试验结果可知，以柴胡原生皂苷含量最高为考察指标，优选最佳碱法炮制工艺条件为：辅料比例100:4、炮制时间6 min、炮制温度125℃和浸润时间2 h；以柴胡次生皂苷含量最高为考察指标，优选最佳碱法炮制工艺条件为：辅料比例100:2、炮制时间8 min、炮制温度225℃和浸润时间2 h。验证试验结果表明，按最佳碱法炮制工艺条件分别制备碱柴胡1和碱柴胡2，其柴胡原生皂苷含量与柴胡次生皂苷含量均高于正交设计中任一试验组，提示正交试验优选的碱柴胡最佳炮制工艺操作简便，稳定可靠。
3.初步的试验结果表明，碱柴胡具有体外抗炎活性，且主要含原生皂苷的碱柴胡1，其醇提物及水提物的抗炎活性明显优于生品柴胡，而主要含次生皂苷的碱柴胡2，其醇提物及水提物的抗炎活性略优于生品柴胡。提示碱法炮制柴胡可有效提高柴胡药材的抗炎活性。
4.细胞膜固相色谱法结合HPLC-DAD双波长法可以快速有效的筛选碱柴胡提取物中的抗炎活性成分，且与文献报道的柴胡主要抗炎活性成分为柴胡皂苷a和柴胡皂苷d相一致。
参考文献（略）
