辐状肋柱花乙酸乙酯萃取物化学成分及抑制肿瘤细胞增殖作用探讨

药学论文哪里有？本实验对辐状肋柱花的化学成分和其体外抗肿瘤活性进行了系统的研究，实验结果丰富了辐状肋柱花的化学成分，筛选出抗肿瘤活性较好的单体化合物，为进一步开发利用辐状肋柱花提供了科学依据和理论基础。

第一章  绪论

1.2  肋柱花属植物的生物活性研究进展

1.2.1  抗肿瘤作用

贾凌云等[13]采用 MTT 法对从辐状肋柱花中分离得到的 13 个𠮿酮类化合物进行抗肿瘤活性研究，实验结果表明这 13 个𠮿酮类化合物对人宫颈癌 HeLa 细胞、人黑色素瘤 A357-S2 细胞、人乳腺癌 MCF-7 细胞、人肝癌 HepG2 细胞及人胃癌 SGC7901 细胞均具有不同程度的抑制作用。Guo HY[14]等同样采用 MTT 法对肋柱花氯仿萃取物，正丁醇萃取物以及水层进行了肿瘤细胞毒性研究，实验结果表明这三个萃取物对人肺癌细胞 A549、人血癌细胞 K562 与人宫颈癌细胞HeLa 的增殖均有一定的抑制作用。

1.2.2  抗菌作用

孙建军等[15]以平皿钢管法测定辐状肋柱花石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位以及正丁醇萃取部位的体外抗菌活性，实验结果表明，乙酸乙酯部位为主要抗菌部位，其对大肠埃希菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等所代表的的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较好的抑菌活性。

1.2.3  降血脂作用

Bao  LD 等[16]研究发现，辐状肋柱花中含有的四种𠮿酮类化合物：1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone、1-hydroxy-3,5,8-trimethoxyxanthone、methyl swertiamarin 和 6,8-dihydroxy-1,2-dimethoxyxanthone，可缓解因摄入高果糖食物引起的高胆固醇血症和高甘油三酯血症。

第三章   实验方法

3.1  辐状肋柱花的提取与萃取流程

取干燥的辐状肋柱花全草（9.0 kg），用 75%乙醇（65.0  L）在室温下浸泡提取 3 次，将提取液合并减压浓缩得乙醇提取浸膏（2.0 kg）。将浸膏溶解于适量的水中，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依极性顺序萃取三次，最终得到石油醚萃取物（209.0 g），乙酸乙酯萃取物（239.0 g）和正丁醇萃取物（502.0 g）。

取辐状肋柱花乙酸乙酯萃取物（239.0 g），用正相硅胶（200-300 目）湿法装柱（11 × 75 cm）干法上样，以石油醚-乙酸乙酯（3:1）和二氯甲烷-甲醇（20:1, 15:1, 8:1, 4:1）溶剂系统进行梯度洗脱，共得到 7 个组分（Fr.1~7）。Fr.2（20.0 g）用正相硅胶（200-300 目）湿法装柱（6.5 × 60 cm）干法上样，以石油醚-乙酸乙酯（7:1, 5:1, 3:1, 1.5:1, 1:1）溶剂体系进行梯度洗脱，共得到 9 个组分（Fr.2-1~2-9）。Fr.2-7（2.1  g）干法上样于制备型 MPLC（C18，80  g，40-60  μm），以甲醇-水（10%~70%,  20  mL/min）进行梯度洗脱，共得到 8 个组分（Fr.2-7-1~2-7-8）。Fr.2-7-4（50.2 mg）干法上样，装于正相硅胶柱（1.5 × 50 cm）中，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇（10:1:0.2, 5:1:0.2）溶剂体系进行梯度洗脱得到化合物 19（5.0 mg），化合物 30（3.0 mg）。Fr.2-7-6（130.2 mg）干法上样，装于正相硅胶柱（1.5 × 50 cm）中，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇（15:1:0.2,  10:1:0.2）溶剂体系进行梯度洗脱得到化合物 1（20.3 mg）。

第四章  结果与讨论

4.1  化合物 1 的结构鉴定

化合物 1：白色无定形粉末，分子式为 C20H22O6，[α]25D  +25.42 (c 0.14, MeOH)，分子量为 358.14。

H-NMR (300 MHz, methanol-d4)谱显示:  苯环上的 6 个氢质子信号 δH (ppm) 6.93 (2H, d, J = 1.2 Hz, H-2, 2′), 6.80 (2H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz, H-6, 6′), 6.75 (2H, d, J = 8.2, H-5, 5′),  由此推断，两个苯环为 ABX 体系, 2 个被氧化的次甲基氢质子信号 δH  (ppm)  4.69  (2H,  d,  J  =  4.2  Hz,  H-7,  7′),  2 个被氧化的亚甲基氢质子信号 δH (ppm) 4.18-4.21 (2H, m, H-9a, 9'a), 3.80 (2H, m, H-9b, 9′b), 2 个甲氧基氢质子信号δH (ppm) 3.83 (6H, s, 3, 3′-OCH3), 2 个次甲基氢质子信号 δH (ppm) 3.10-3.13 (2H, m, H-8, 8′)。

C-NMR  (75  MHz,  methanol-d4)谱共显示 20 个碳信号,  包括两个苯环上的碳信号 δC (ppm)  149.1  (C-4,  4′),  147.3  (C-3,  3′),  133.8  (C-1,  1′),  120.0  (C-6,  6′), 116.1 (C-5, 5′), 111.0 (C-2, 2′), 2 个被氧化的次甲基碳信号 δC (ppm) 87.5 (C-7, 7′), 2 个被氧化的亚甲基碳信号 δC (ppm)  72.6  (C-9,  9′),  2 个甲氧基碳信号 δC (ppm) 56.4 (3, 3′- OCH3), 2 个次甲基碳信号 δC (ppm) 55.3 (C-8, 8′)。

结合旋光度与 C-7, 7′、C-1, 1′的化学位移，与参考文献[27, 28]进行对比（见表4）确定化合物 1 的相对构型为 7S、7′S，如图所示，根据1H、13C-NMR 谱数据以及参考文献[28]确定化合物 1 为(+)-pinoresinol。

4.2  化合物 2 的结构鉴定

化合物 2：黄色油状，分子式为 C21H24O7，[α]25D  +16.57 (c 0.03, MeOH)，分子量为 388.15。

1H-NMR  (300  MHz,  CDCl3)谱显示:  苯环上的 5 个氢质子信号 δH (ppm) 6.88-6.90 (2H, m, H-2′, 6′), 6.81-6.83 (1H, m, H-5′), 6.58 (2H, s, H-2, 6), 2 个羟基氢质子信号 δH (ppm) 5.30 (2H, s, 4, 4′-OH), 2 个被氧化的次甲基氢质子信号 δH (ppm) 4.73  (2H,  dd,  J  =  8.9,  4.4  Hz,  H-7,  7′),  2 个被氧化的亚甲基氢质子信号 δH  (ppm) 4.22-4.28 (2H, m, H-9a, 9′a), 3.87 (2H, d, J = 3.2 Hz, H-9b, 9′b), 3 个甲氧基质子信号 δH (ppm) 3.91 (9H, s, 3, 3′, 5-OCH3), 2 个次甲基氢质子信号 δH (ppm) 3.07-3.13 (2H, m, H-8, 8′)。

13C-NMR (75 MHz, CDCl3)谱共显示 21 个碳信号,  包括两个苯环上的碳信号δC (ppm) 147.3 (C-3, 5), 146.8 (C-3′), 145.4 (C-4′), 134.4 (C-4), 133.0 (C-1′), 132.3 (C-1), 119.1 (C-2′), 114.4 (C-5′), 108.7 (C-6′), 102.8 (C-2, 6), 2 个被氧化的次甲基碳信号 δC (ppm) 86.3 (C-7), 86.0 (C-7′), 2 个被氧化的亚甲基碳信号 δC (ppm) 72.0 (C-9), 71.8 (C-9′), 3 个甲氧基碳信号 δC (ppm) 56.3 (3, 5-OCH3), 56.1 (3′-OCH3), 2个次甲基碳信号 δC (ppm) 54.6 (C-8), 54.3 (C-8′)。

结合旋光度与 C-7, 7′、C-1, 1′的化学位移，与参考文献[29, 30, 31]进行对比（见表 6）确定化合物 2 的相对构型为 7S、7'S，如图所示，根据1H、13C-NMR 谱数据以及参考文献[29]确定化合物 2 为(+)-medioresinol。

第五章  结论

1.本研究从辐状肋柱花的乙酸乙酯层中共分离得到 30 个化合物，包括 11 个木脂素类化合物（111），7 个黄酮类化合物（1218），4 个三萜类化合物（1922），4 个环烯醚萜类化合物（2326），1 个香豆素类化合物（27），1 个倍半萜类化合物（28），1 个降碳倍半萜类化合物（29）以及 1 个单萜类化合物（30）。

2.化合物 23 是首次从自然界中分离得到，化合物 4、611、21、22 和 2830 是首次从龙胆科植物中分离得到，化合物 13、5、14、19、20、24、25 和 27 是首次从肋柱花属中分离得到，化合物 18 是首次从辐状肋柱花中分离得到，为本植物和本属植物的分类学提供了理论依据。

3.活性实验结果表明，在化合物浓度为 30  μM 时，化合物 7、12、14、15、19和 20 对人肺癌细胞（A549）增殖具有抑制作用；化合物 7、12、1315 和 1923对人肝癌细胞（SK-Hep1）增殖具有抑制作用；化合物 7、15、19 和 20 对人宫颈癌细胞（HeLa）增殖具有抑制作用。综合上述实验结果发现化合物 7、15、19、20 对这三种肿瘤细胞均有一定的抑制作用，其中化合物 19，20 的抑制作用最为显著，化合物 19 在人肺癌细胞（A549）、人肝癌细胞（SK-Hep1）和人宫颈癌细胞（HeLa）中的 IC50值分别为 20.37 ± 2.06、13.79 ± 1.23、29.14 ± 1.45 μM，化合物 20 在人肺癌细胞（A549）、人肝癌细胞（SK-Hep1）和人宫颈癌细胞（HeLa）中的 IC50值分别为 29.26 ± 2.35、16.24 ± 2.09、21.34 ± 1.62 μM。本文首次报道了化合物 19 针对 SK-Hep 1 细胞的增殖抑制活性。

4.综上所述，本实验对辐状肋柱花的化学成分和其体外抗肿瘤活性进行了系统的研究，实验结果丰富了辐状肋柱花的化学成分，筛选出抗肿瘤活性较好的单体化合物，为进一步开发利用辐状肋柱花提供了科学依据和理论基础。

参考文献（略）