药学论文哪里有？本研究证实了北桑寄生提取物鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖苷和富集总黄酮的体外抗炎效果，并对与其相关的细胞信号通路进行了研究，为北桑寄生的抗炎药效提供了一定的理论基础。鉴于北桑寄生提取物的复杂性，后续可对其它的单体化合物的抗炎药效进行比对研究。同时，可以构建动物炎症模型进行深入的体内抗炎研究，以此来为北桑寄生抗炎的具体作用机制提供更完善的科学根据。
第一部分 北桑寄生黄酮类化合物对 RAW264.7 细胞的抗炎机制研究
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验样品
富集总黄酮（实验室自制，以芦丁标准品为对照，黄酮含量为 100%），鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖苷（实验室自制，纯度为 96.68%），鼠李素（实验室自制，纯度为95.32%），吲哚美辛（Sigma 公司购买，纯度 ≥ 98%）。
分别称取 10 mg Rha、ARR、FEE，用高糖 DMEM 培养基分别定容至 10 mL，配制成母液浓度分别为 1 mg/mL 的溶液。
吸取 45 mL DMEM 高糖培养基，加入 5 mL 的 10% FBS，再加入 100 U/mL 的青链霉素混合液，配制成完全培养基。
吸取 9900 μL 高糖 DMEM 培养基到 15 ml 无菌离心管中，加入 100 μL 浓度为 10mg/mL 的 Indo，配制成终浓度为 100 μg/mL 的 Indo。
观察细胞生长情况，细胞密度达到 70-80% 时进行传代，否则影响细胞的生长，导致细胞死亡，悬浮。倒掉培养瓶内的培养液，用 PBS 洗涤两次，加入 2 mL 配置好的完培，用细胞刮刀轻轻地将细胞刮下来，移液枪轻轻吹打成细胞悬液，然后吸入 5mL 的离心管内，1500 rpm 离心 5 分钟，弃去上清液，加入 1 mL 的完全培养基，转移至新的培养瓶中。
第二部分 北桑寄生黄酮类化合物对 THP-1 细胞的抗炎机制研究
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验样品
同第二章 1.1.1
1.1.2 材料与试剂
2 结果
2.1 细胞生长曲线
细胞生长曲线可以观察到细胞的指数增长期，从而得出细胞的最佳接种时期，也是核算细胞活力的重要指标。如图 2-1，即为 THP-1 细胞的生长曲线，细胞在 36 h处于迅速增长期，且在 48 h 后细胞的增值速度低于死亡速度。因此，本实验在后续的试验中细胞接种 48 h 后进行 PMA 刺激分化。
第三部分 结论与展望
1 主要结论
1.1 北桑寄生黄酮类化合物对 RAW264.7 细胞的抗炎机制研究
在 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞炎症模型中，采用 CCK-8 法得出了细胞的生长曲线及药物对细胞的毒性作用，筛选出了 ARR、FEE 的低中高浓度和阳性药 Indo、Rha的浓度。Griess 法检测 NO 含量；ELISA 法检测各组 IL-6，IL-1β，PGE2的含量；RT-qPCR法检测 iNOS，IL-6，IL-1β，COX-2 的 mRNA 含量；ARR 和 FEE 抑制了这些炎症介质和促炎因子的释放，减弱了炎症反应。Western blot 法检测了 NF-κB p65 蛋白的磷酸化与核易位，LPS 诱导 NF-κB p65 的磷酸化，使其从细胞质中易位到细胞核中；ARR 和 FEE 作用后，下调了 NF-κB p65 的磷酸化，封闭了 NF-κB p65 的核易位。此外，我们用免疫荧光显微镜验证了这一结果。Western blot 法检测分析到 ARR 和 FEE可以激活 Nrf2 及其靶蛋白。IHC 检测分析到 ARR 和 FEE 可以促进 NLRC3 分子的释放，抑制 TRAF6，NF-κB p65 蛋白的产生。
1.2 北桑寄生黄酮类化合物对 THP-1 细胞的抗炎机制研究
在 PMA 刺激分化，LPS 诱导的 THP-1 细胞炎症模型中，采用 CCK-8 法得出了细胞的生长曲线及药物对细胞的毒性作用，筛选出了 ARR、FEE 的低中高浓度和阳性药 Indo、Rha 的浓度。ELISA 法检测各组 TNF-α，caspase-1 的含量，ARR 和 FEE抑制了这些炎症介质和促炎因子的释放，减弱了炎症反应。Western blot 法检测发现ARR 和 FEE 可以抑制由 LPS 诱导的 NLRP3，ASC，caspase-1 的蛋白含量的增加。IHC检测分析到 ARR，FEE 抑制 NLRP3，TLR4，NF-κB p65 蛋白的产生。
2 创新与展望
吲哚美辛是一种化学药物，毒性作用大；FEE 是北桑寄生中提取出的黄酮类化合物；Rha 是由 FEE 生物转化得到，它在市面上价格昂贵且有文献报道了它的抗炎效果；ARR 是从 FEE 中分离出的单体化合物且是 FEE 中的主要活性成分，它的水溶性很好，毒性作用小，未曾有文献报道 ARR 的抗炎效果，有作为抗炎药物的潜力，值得更深一步的研究。
本研究证实了北桑寄生提取物鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖苷和富集总黄酮的体外抗炎效果，并对与其相关的细胞信号通路进行了研究，为北桑寄生的抗炎药效提供了一定的理论基础。鉴于北桑寄生提取物的复杂性，后续可对其它的单体化合物的抗炎药效进行比对研究。同时，可以构建动物炎症模型进行深入的体内抗炎研究，以此来为北桑寄生抗炎的具体作用机制提供更完善的科学根据。
参考文献（略）
