药学论文哪里有？本文的结论有：1. 本研究成功制备并表征了载铜绿假单胞菌 DNA 疫苗温敏水凝胶系统。2. PLGA-PEG-PLGA 温敏水凝胶可增强 DNA 疫苗诱导的体液免疫及细胞免疫反应水平，是研发 DNA 疫苗非常有应用前景的递送系统。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验试剂
实验试剂
.............................
2 结果
2.1 PLGA-PEG-PLGA 水凝胶具有合适的相变温度及凝胶化时间(37 ℃)
为了验证 PLGA-PEG-PLGA 水凝胶的温度敏感性，我们利用倒置试管法进行判 断 。 图 1 结 果 表 明 ， 在 4 ℃ 时 ， 含 或 不 含 PEI/pDNA 复 合 物 的 20%PLGA-PEG-PLGA 水凝胶溶液均表现为可自由流动的溶液态，而在 37 ℃时则表现为凝固不动的凝胶态。我们测定了 PLGA-PEG-PLGA 的相变温度，结果如表 1所示，含或不含 PEI/pDNA 复合物的 20% PLGA-PEG-PLGA 水凝胶溶液在 32 ℃左右时即发生溶胶-凝胶相变，转化为不能流动的凝胶，37 ℃时可以在 2 min 内形成稳定的凝胶态。
图 1 20%水凝胶在不同温度下的形态
...............................
2.2 PEI/pDNA 复合物的浓度对 PLGA-PEG-PLGA 的相变温度无明显影响
通过倒置试管法检测含有不同浓度 PEI/pDNA 复合物水凝胶的相变温度，结果如表 2 所示，当 PEI/pDNA 复合物浓度分别为 0、0.05、0.10、0.20 μg/μL 时，水凝胶样品的相变温度变化在 31.0~32.0 ℃，各组的相变温度之间无统计学差异(P＞0.05)，这说明加入的 PEI/pDNA 复合物浓度对水凝胶的相变温度无明显影响。
表 2 含不同浓度 PEI/pDNA 复合物的 20%水凝胶相变温度结果分析
...............................
3 讨论
铜绿假单胞菌感染是临床治疗的一大难题，由于铜绿假单胞菌对现目前大多数抗生素都存在耐药性，并且多重耐药菌株感染率正在逐年上升，因而研究 PA疫苗可作为预防 PA 感染的一项有应用前景的策略。PA 疫苗经过几十年的发展，已有不少候选抗原疫苗在各种动物感染模型证实其具有免疫效力并进入临床试验阶段[12]，但目前仍未应用于临床。OprF 抗原基因高度保守，其在 PA 急性感染及慢性感染过程中均可表达[15]，相关临床前试验及临床试验均证实其具有良好的免疫原性[20, 21, 23]，因而 OprF 是非常有应用前景的一个候选抗原。我们课题组前期实验结果也证实 pVAX1-OprF-VP22 DNA 疫苗可引起小鼠体内产生体液及细胞免疫反应，对 PA 肺部感染模型具有保护作用[23]。但是 DNA 疫苗存在抗原提呈细胞摄取率低、易被体内核酶降解而导致免疫原性不足的问题[30]，因而需要新的方法策略去改善这一不足。
温敏水凝胶通常为自由流动的溶胶态，在低温或室温下具有良好的可注射性，被注入目标部位后，因温度变化载药系统可以自发变成半固体凝胶，可以作为药物的缓释库[39]。PLGA-PEG-PLGA 为物理交联的 PEG-PLGA 三嵌段共聚物，是用于缓释药物载体、细胞和组织工程以及耳部疾病药物输送系统的最深入研究的温敏水凝胶[40]。利用 PLGA-PEG-PLGA 作为 DNA 疫苗的递送载体，在体内注射部位形成凝胶持续释放负载的质粒 DNA，作为抗原储库起到延长释放、增加抗原提呈细胞对抗原摄取的作用。
在本研究中，通过倒置试管法发现 20% PLGA-PEG-PLGA 水凝胶在 4 ℃为自由流动的液体，而 37 ℃表现为不能流动的凝胶（图 1）；PLGA-PEG-PLGA 水凝胶相变温度在(32 ± 0.5) ℃，加入 PEI/pDNA 复合物后相变温度为(32.5 ± 0.5) ℃，含或不含 PEI/pDNA 复合物的水凝胶在 37 ℃水浴锅中均可在 2 min 内形成凝胶（图 1）。同时我们检测了含不同浓度 PEI/pDNA 复合物水凝胶的相变温度，发现其相变温度无统计学差异（P＞0.05），这说明加入 PEI/pDNA 复合物对水凝胶的相变温度无明显影响（图 2、表 2）。
..................................
全文总结
1.本研究成功制备并表征了载铜绿假单胞菌 DNA 疫苗温敏水凝胶系统。
2. PLGA-PEG-PLGA 温敏水凝胶可增强 DNA 疫苗诱导的体液免疫及细胞免疫反应水平，是研发 DNA 疫苗非常有应用前景的递送系统。
参考文献（略）
