中药能够多靶点、多途径的调控前列腺疾病，而且副作用少，现在越来越多的医本课题已申请专利《一种抗前列腺增生药物组合物》，现从药学、药效学及作用机制对羊红膻癃闭平颗粒进行研究，为后续开发一种质量稳定可控、疗效确切、作用机制较为明确的抗前列腺增生的新药提供实验依据，奠定良好基础。主要研究成果如下：采用回流提取方法，以总黄酮提取率和出膏率的综合评分为指标，在单因素的基础上，采用正交实验设计考察加水量、提取时间、提取次数三个因素的影响，确定了羊红膻癃闭平复方的最佳提取工艺为：加 12 倍量的水，提取 3 次，每次1 小时；以颗粒的成型率为指标，考察辅料的种类及用量、润湿剂的浓度，得出羊红膻癃闭平颗粒最佳成型工艺为：药粉-糊精（1:0.4），混匀，以 85%乙醇制颗粒，60℃干燥，整粒，即得。
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前言
课题组前期研究发现，羊红膻有治疗前列腺炎的作用，所以本课题在前期实验的基础上更深一步的研究羊红膻复方抑制前列腺增生的药效及作用机制，本课题以各药味所共有且含量较高的黄酮类成分为主要指标，对提取工艺进行优化，将其制成携带方便、便于保存和运输的颗粒剂，并建立质量标准，以丙酸睾丸酮诱导法建立去势大鼠前列腺增生模型，探讨羊红癃闭平颗粒对 BPH 大鼠的保护作用及其机制，为深入开发该方提供依据。良性前列腺增生（BPH）是中老年男性常见疾病[1-2]，并且随着年龄的增加发病率逐渐上升，据估计，在男性 60 岁后，BPH 的患病率达到 70%，在 80 岁时，逐渐增加到 80%[3-4]。本病的发生往往伴随着膀胱刺激症、梗阻等相关症状的发生，在临床上表现为包括尿频，尿急，尿失禁，进行性排尿困难以及膀胱不完全排空等症状，临床上通常表现为患者主观症状为主的下尿路症状[5-6]。目前，前列腺增生的发病机制还不明确，大多数学者认为，年龄的增加、睾丸功能正常等是 BPH 发生发展的基础和必备条件[7-8]，另外有研究表明，BPH 发病机制与多种因素有关，包括雄激素、雌激素、生长因子和/或神经递质[9]、炎症免疫[10]等有关，这些因素会导致纤维肌间质和腺上皮的逐渐生长，导致前列腺体积的增加[11]。
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第一部分 羊红膻癃闭平颗粒的提取工艺研究
1 仪器和材料
实验药材：羊红膻药材购自陕西省黄安县，葛根、山楂、枸杞子、西洋参购自河北安国，由山西中医药大学裴香萍副教授鉴定分别为伞形科茴芹属植物缺刻叶茴芹Pimpinella thellungiana Wolff的全草、豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.)Ohwi 的干燥根、蔷薇科植物山里红 Cralaegus pinnatifida.Bge.var.major N.E.Br.的干燥成熟果实、茄科植物宁夏枸杞 Lycium barbarum L. 的干燥成熟果实、五加科植物西洋参 Panax quinquefolium L.的干燥根；实验对照品：芦丁（批号：100080-201811）；无水葡萄糖（批号：110833-201707），以上均购自中国食品药品检定所。
2 实验方法和结果
精密量取“2.1.1”项下供试品溶液 2mL，“2.1.2”项下对照品溶液 5mL，置于25mL 容量瓶中，依次加入 5% NaNO21 mL，静置 6min，加入 10% Al(NO3)31mL，静置 6min，加入 4% NaOH 10 mL，静置 15 min，用 50%甲醇定容，溶剂用相同的方法定容做空白溶液[21]。分别用全波长扫描二者的吸收图谱，结果显示二者在 507nm 处均有最大吸光度，故选 507nm 为最大吸收波长，见图 1-1。分别吸取“2.1.2”项下对照品溶液 0.5、1、2、4、6、8mL，置于 25mL 容量瓶中，按“2.2”项下方法显色，以标准溶液的浓度 C 为横坐标，以吸光度 A 为纵坐标作图，标准曲线见图 1-2，标准曲线方程：A=11.197C-0.0119(r=0.9995)，表明芦丁在 5.96~95.49mg/L 范围内与吸光度 A 成良好线性关系。
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第三部分 羊红膻癃闭平颗粒的质量控制研究.......................16
1 实验材料..........16
2 实验方法和结果.........................17
第四部分 羊红膻癃闭平颗粒抑制前列腺增生作用及作用机制....................................41
1 仪器与材料........41
2 实验方法.............42
3 小结与讨论...............51
第五部分 结论............55
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第四部分 羊红膻癃闭平颗粒抑制前列腺增生作用及其机制研究
1 仪器与材料
羊红膻癃闭平颗粒，每克内容物相当于 2.33g 生药，由山西中医药大学中药化学实验室自制（批号:20181224）；西药阳性对照药：非那雄胺片，规格：每片 5mg，批号：N011372，批准文号：国药准字 J20150143，杭州默沙东制药有限公司；中药阳性对照药：癃闭舒胶囊，规格：每粒 0.3g，批号：161112，批准文号：国药准字 Z10960007，石家庄科迪药业有限公司；丙酸睾丸酮注射液，规格 1mL:25mg，批号：170117，批准文号：兽药字 110251054，购自宁波第二激素厂。
2 实验方法
体重 180-220g 的 SD 雄性 SPF 级大鼠 90 只。随机选取 78 只大鼠，切除睾丸，手术 7 天以后，根据前列腺增生模型大鼠的病理状况，选择恢复状态好的72 只大鼠，随机分为模型对照组、癃闭舒胶囊组、非那雄胺片组和羊红膻癃闭平颗粒高、中、低剂量组，每组 12 只。其余 12 只未去势的大鼠做假手术作为空白对照组。于每日观察大鼠的饮食、饮水情况，以及垫料清洁情况，观察大鼠毛发及活跃程度[54]。大鼠称重，按照人与动物间体表面积折算的等效剂量的方法计算麻醉剂量，按照 0.3mLl/100g 腹腔注射 10%水合氯醛，麻醉，皮肤消毒后，摘除双侧睾丸，缝合（空白组做假手术）。然后在其大腿内侧肌处肌内注射青霉素 20 万 U/kg/d，连续 7d。第 8d，挑选所有手术以后恢复状态较好的造模大鼠，随机选 72 只大鼠分为 6 组，每组 12 只；经 1 周自然恢复后，按照人与动物间体表面积折算的等效剂量的方法，按照 5mg/kg 的剂量，每只皮下注射丙酸睾酮注射液（溶于橄榄油），连续 30d，空白对照组注射等量溶媒（橄榄油）。每日灌胃给药 1 次，连续给药 30d。在末次灌胃，禁食不禁水 12 小时后称量体重，使用 10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，腹主动脉取血后完整摘取前列腺，去除周围脂肪组织，用生理盐水清洗腺体表面血渍后滤纸吸干表面水分，电子天平称重记录后，留取部分组织保存于-80℃冰箱备用，余下部分组织使用 10%中性甲醛溶液固定[55]。大鼠 10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，活体腹腔主动脉取血，于冰箱中冷藏，随后全血 3500 r/min 离心 10 min，取上清，采用试剂盒测定大鼠血清内 SOD酶活性以及血清 MDA 的含量，研究各组方对大鼠体内抗氧化水平的影响。
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参考文献
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