本文是一篇药学论文，药学专业培养具备药学学科基本理论、基本知识和实验技能，能在药品生产、检验、流通、使用和研究与开发领域从事鉴定、药物设计、一般药物制剂及临床合理用药等方面工作的高级科学技术人才。 药学专业学生主要学习药学各主要分支学科的基本理论和基本知识，受到药学实验方法和技能的基本训练，具有药物制备、质量控制评价及指导合理用药的基本能力。（以上内容来自百度百科）今天为大家推荐一篇药学论文，供大家参考。
前言
溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)是从属于炎症性肠病(Inflammatory BowelDisease，IBD)的一种慢性非特异性肠病[32]，以炎症、溃疡、腹痛腹泻为主要表现，并伴随体重下降，另偶有出现肝功能障碍、皮肤病变及组织器官的损害，故现已被看作是一种全身系统性疾病。UC 发病后病程较长，易反复发作，但发病机制尚不明确，其中环境因素、免疫功能异常、肠道菌群失调、遗传因素等多种因素相互作用都是现阶段研究的主要影响因素。有研究发现，人体肠道内存在大量菌群，它们影响着肠道的免疫功能[33]，且对肠道疾病发生有着至关重要的作用。人体的肠道环境是一个复杂的微生态系统，是人体内储存细菌与体内毒素的仓库。肠道内既包含了共生无害的细菌，也存在潜在性病原菌[33]，它们共存于复杂的肠道微环境中，能够触发人类肠道的免疫炎症反应。这些细菌主要分布在末端小肠和结肠，并生存在肠道黏膜表面上。正常的肠道微生态可以通过防止有害病毒的入侵与繁殖，调节肠道免疫功能等，从而参与宿主体内的代谢，有助于维持肠道的微生态平衡。肠道中真菌菌群的存在也对维持肠道菌群内稳态平衡发挥着必不可少的作用。在正常生理状态下，肠道内真菌菌群与细菌、病毒之间存在稳定对抗、协同共生的关系[3]，一旦病理状态发生，由于真菌菌群多态性会增多，对机体作用也相应显著。
一系列的临床和动物实验研究显示 UC 患者与健康者的肠道菌群存在差异。这种差异首先表现在 UC 患者肠道菌群多样性减少，即肠道菌群种类的减少，如革兰阴性菌的数量明显上升。其次，UC 患者肠道病原菌比例增高，如对肠道微环境有益的优势菌群中，丁酸梭菌出现减少，而 UC 患者的结肠黏液中致病菌的数量比健康人群明显增多。由于肠道内细菌所占比例较大，真菌在肠道内发挥的作用往往受到忽视。有研究表明，肠道内真菌分布异常与炎症性肠病尤其是 UC 的发生有着很大关联。UC 患者肠道中可检测出显著高于正常人群的真菌含量，其中数量最多的白色念珠菌会在固有免疫低下的 UC 患者肠道内定植，并在体内传播感染。抗酿酒酵母菌抗体(ASCA)是临床检测 UC 的重要血清学标志物之一，已有研究证实，白念珠菌感染与 ASCA 的升高直接相关。由此我们不难看出，真菌虽不在肠道微环境中占主体地位，但是其对调节肠道免疫和影响细菌的生长繁殖中仍发挥着重要作用。目前西药治疗 UC 主要从控制炎症、调节免疫等方面入手，但易出现耐药性、过敏症状等不良反应情况。相比之下，中药治疗 UC 具有疗效好、不良反应少、所需费用少等显著优势。目前常用的治疗方法有中药灌肠、中药口服联合灌肠、针灸治疗、药穴结合等，另有注射液与肠溶胶囊是中医药治疗 UC 的新剂型。随着肠道菌群研究地不断推进，继传统的微生态制剂、肠内外营养等方法外，出现一种新型治疗 UC 的方法--“粪菌移植”[32]，是通过将健康人的正常菌群从粪便中的提取出来并移植到 UC 患者肠道内，从而使患者体内的菌群得到重塑与改变。此法由于粪源的选择存在困难，粪源内菌群的提取与培养等相关技能并不完善，过程繁琐、费用高昂等问题也提高了这一治疗方法实施的难度。“白头翁汤”出自《伤寒论》，由白头翁、黄柏、黄连、秦皮四味中药组成，中医学说认为该方为清热解毒剂。白头翁作为该方中的方君药，有凉血、止痢的功效，而黄连、黄柏为臣药，可清中焦及下角之火，佐使药为秦皮。白头翁汤在临床上常用于各种痢疾及溃疡性结肠炎防治，课题组前期研究[8-9]，通过使用 80%乙醇处理白头翁汤并使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇对白头翁汤乙醇提取物进行萃取，并从中筛选出抗白念珠菌活性最强的提取物,证实白头翁汤正丁醇提取物（BAEB）对白念珠菌具有显著抑制作用，在此基础上，本研究主要探究 BAEB有可能通过抑制肠道白念珠菌而发挥其防治溃疡性结肠炎的作用。
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第一部分 白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植的小鼠溃疡性结肠炎模型的作用研究
1 实验材料
1.1 实验动物
健康 SPF 级昆明小鼠 80 只，雄性，4 周龄，体重 20±5g，购于安徽医科大学动物实验部。实验动物分 7 组，正常对照组（不作任何处理）、DSS 模型对照组（自由饮用 DSS 且不用药治疗）、DSS+C.A 组（自由饮用 DSS 后并加白念珠菌作用且不用药治疗）、BAEB 治疗组（DSS+C.A 造模后给药，分高、中、低剂量组）、Mesalazine 治疗组（DSS+C.A 造模后给药），每组 12~15 只小鼠。
1.2 菌株
本实验所用菌株为白念珠菌标准株 SC5314，由解放军第二军医大学姜远英教授惠赠。
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2.实验方法
2.1 白头翁汤正丁醇部位的提取
将白头翁汤复方用粉碎机粉碎后倒入烧瓶，加入 80%乙醇浸泡一夜后（70℃）冷凝回流 3 次，从沸腾时开始计时持续加热 3h 后冷却过滤，操作重复三次，收集三次滤液并用旋转蒸发仪浓缩(总提物)，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取不同有效部位，最终得到白头翁汤正丁醇提取物（Butyl alcohol extract ofBaiTouWeng decoction，BAEB）。将提取好的 BAEB 溶液按 0、1、2、4、8、16、32、64、128、256、512 μg/mL的终浓度为进行配制，取各浓度的 BAEB 100μL 与浓度为 2×103CFU/mL 的 100μL菌悬液共同加入 96 孔微量培养板中，混合后于静置恒温箱 37℃培养 48h。后取出观察，各浓度组与空白组相比，将肉眼看不到菌落的浓度为判定为 MIC 浓度。
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3.结果......... 41
3.1 BAEB 对 C.A 作用下的 Caco-2 细胞形态的影响..........41
3.2 MTT 法检测 BAEB 对 Caco-2 细胞活性的影响...........42
3.2 BAEB 对 C.A 作用下的 Caco-2 细胞上清液中 IL-8、IL-6、IL-1β、HBD-2、HBD3 表达量的影响..........44
3.3 qRT-PCR 检测 BAEB 对 C.A 作用下 Caco-2 细胞 TLRs及 Dectin-1 基因表达的影响..............44
4.讨论......... 45
5.结论......... 48
4.讨论
实验部分已经探讨到白念珠菌具有酵母-菌丝二相性，在肠道中主要依靠酵母相定植于黏膜。在免疫功能正常的健康人群中，白念珠菌作为肠道菌群的重要组成部分，同时也参与了肠道稳态的维持。但在如 AIDS、器官移植患者等免疫功能低下人群，肠道微生态平衡被打破，定植在肠道的白念珠菌即可引起内源性念珠菌病，尤其在固有免疫低下时，白念珠菌会穿越肠壁进入血液进而引发系统性感染，而肠黏膜上皮细胞在局部抗微生物感染过程中发挥重要作用。这些细胞不仅构成生理上屏障，同时通过产生细胞因子以及抗微生物蛋白（如防御素）构成固有免疫系统的屏障[12]。课题组前期研究[13-14]已发现，BAEB对白念珠菌具有显著的抑制作用，治疗白念珠菌有确切疗效。我们已研究发现：BAEB在体外可有效地抑制白念珠菌的生长[15]，体内实验亦发现其对白念珠菌性阴道炎有一定的预防和治疗作用[15]。近年研究发现，溃疡性结肠炎的发生发展与肠道白念珠菌的异常定植有关[16-19]，白头翁汤在临床上常被用于溃疡性结肠炎防治[20]。因此推测，BAEB有可能通过抑制肠道白念珠菌而发挥其防治溃疡性结肠炎的作用。本实验从体外研究BAEB抗白念珠菌的作用，以天然免疫因子TLR1、TLR2、TLR4、TLR5及下游炎性因子等表达为切入点，从体外实验探讨BAEB对涉及固有免疫的细胞因子（IL-6、IL-8、IL-1β）、防御素（HBD-2、HBD-3）以及Toll样受体（TLR1、TLR2、TLR4、TLR5）等表达的影响，从固有免疫角度对白头翁汤防治肠道念珠菌相关性疾病进行阐释。本实验以人结肠上皮细胞（Caco-2细胞系）为模型，通过热灭活将白念珠菌体控制在酵母相（也称孢子相），是为了保留其免疫原性[21]，以免其毒力影响了免疫机制的相关研究。β葡聚糖受体Dectin-1作为C型凝集素样受体中的一员，在诱导固有免疫反应中同样发挥着重要作用，可介导真菌的结合、摄取并有助于机体免疫应答的起始喝调节。有研究发现，Dectin-1在肠道粘膜反应中发挥着重要的识别作用[22]，Dectin-1基因的多态性与溃疡性结肠炎的严重程度有一定的相关性。本实验检测到白念珠菌定植后的Caco-2细胞内Dectin-1的表达显著升高，说明肠道共生的真菌可被Dectin-1识别，并随着真菌量的增加有所上调，BAEB干预后可降低其表达，推测可能与BAEB可抑制白念珠菌有关。#p#分页标题#e#
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结论
小鼠自由饮用一定浓度的 DSS 溶液可成功复制溃疡性结肠炎的模型，白念珠菌通过灌胃作用于小鼠肠道后，可加重对胃肠道的损伤。BAEB 用药干预后可降低小鼠血清及肠粘膜组织中相关细胞因子、防御素及 Toll 样受体的表达，并有效改善小鼠的病理状态，推测可能通过直接抑制白念珠菌及由该菌所引发的固有免疫过程中所涉及的炎症损伤。体外实验同样证实了 BAEB 预保护细胞后，能有效降低C.A 作用下的 Caco-2 细胞相关细胞因子、防御素及 Toll 样受体的表达，这为 BAEB临床治疗受真菌诱导影响或加重的溃疡性结肠炎的治疗提供了一定的实验依据。
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参考文献（略）
