本文是一篇药学论文，药学专业是培养具备药学学科基本理论、基本知识和实验技能，能在药品生产、检验、流通、使用和研究与开发领域从事鉴定、药物设计、一般药物制剂及临床合理用药等方面工作的高级科学技术人才的学科。（以上内容来自百度百科）今天为大家推荐一篇药学论文，供大家参考。
前言
在由白念珠菌引起的人类疾病中，外阴阴道念珠菌病（VVC）因其慢性和复发性的特点，是迄今为止最常见的一种高发疾病。最近的流行病学调查显示阴道念珠菌的发病率接近全球传染病的最高发病率的 2％[1]。虽然阴道念珠菌不属于致死性疾病，但其慢性和反复的特点可引起高水平的焦虑且严重降低生活质量，给患者带来沉重的经济负担，此外妊娠期的阴道感染还会增加胎儿的早产率、畸胎等不良反应[2-3]。阴道刺激，外阴灼热，瘙痒，肿胀是 VVC 最常见的症状，“豆腐渣样”阴道分泌物被认为是其典型的临床症状。VVC 治疗的主要临床目标是在 24-48 小时内立即减轻外阴阴道炎症的体征和症状，并且治疗后 4-7 天实现真菌学治愈的目标，此外预防复发是治疗的第二步[4]，这通常需要长期治疗，过程涉及到替代性抗真菌药物和方法的选用[5-7]。目前治疗 VVC 的方法主要分为局部用药和口服治疗，但疗效往往不是很理想。常用的有阴道局部外用抗真菌药，如克霉唑栓剂，虽起效迅速，但只是消除症状，并不能完全清除体内寄居的念珠菌，并未针对复发的原因进行根本的解决，故治疗后病情易复发[8]，而常见的口服抗真菌药物如伊曲康唑、氟康唑等不仅价格不菲且对肝肾等脏器产生较强的毒副作用，此外，长期大量使用单一的口服抗真菌药物使得复发性 VVC 分离株的白念珠菌对抗真菌药物的敏感性逐渐降低[9]，真菌药物严重的耐药性已不容忽视[10]。
中医药学凝聚着中华民族几千年的健康养生理念及其实践经验，是中国古代科学的瑰宝。中医理论认为[11]，VVC 可以归结为 “带下”、“阴痒”的范畴。“带下”、“阴痒”的病机，不外湿浊为患，而湿为脾所主，湿之为患，乃因脾失健运所致。且会阴、少腹乃厥阴肝经经脉所环绕，为肝之分野，肝气有余，常横克脾土，脾失健运，湿从内生；且肝以气为用，肝气常有余，“气有余便是火”，邪易从阳化热，与湿相合，出现肝经湿热内蕴，故“带下”、“阴痒”以湿热为病患者居多。中药是中医药学的重要组成部分，是我国传统的防治疾病的重要武器。中药用于真菌感染的治疗由来已久，与传统抗真菌药物相比，中药及中药复方治疗阴道炎具有抗真菌作用强、疗效稳定、毒性低、不易耐药等优点[12-14]。郑玲[15]指出龙胆泻肝汤对肝经湿热与肝胆实火为主要病机的多种妇科疾病：多囊卵巢综合征、慢性盆腔炎、外阴瘙痒症、痛经等疗效显著。赖双玲等[16]研究发现龙胆泻肝汤加减治疗湿热型复发性外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）疗效确切，能明显改善其阴道和外阴症状。曹俏春[17]研究发现在外阴阴道假丝酵母菌感染的临床治疗上，龙胆泻肝汤联合克霉唑栓可以取得理想的治疗效果，而且复发率较低。龙胆泻肝汤在妇科疾病的治疗方面，已成为历代医家临床广泛应用的良方。龙胆泻肝汤[18]出自《医方集解》，由龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、当归、生地黄、柴胡、生甘草、车前子组成。方中龙胆草大苦大寒，能上清肝胆实火，下泄肝胆湿热，歇火除湿，为方中君药。黄芩、栀子两药苦寒，归经肝胆三焦，泻火解毒，燥湿清热，为臣药，加强君药清热除湿的功效。车前子、泽泻、木通 渗湿泻热，导湿热下行，从水道而去，使邪有出路，则湿热无留，用以为佐；然肝为藏血之脏，肝经实火，易伤阴血，所用诸药又属苦燥渗利伤阴之品，故生地养阴，当归补血，祛邪而不伤正，柴胡疏肝畅胆，引诸药归于肝胆之经，且柴胡与黄芩相合，既解肝胆之热，又增清上之力，以上六味皆为佐药，甘草为使，既可缓解苦寒之品防其伤胃，又可调和诸药。其功用为清肝胆实火，泻下焦湿热，主治肝胆湿热下注证：症见阴肿、阴痒，阴汗，小便淋浊，或妇女带下黄臭等。龙胆泻肝汤对顽固性偏头痛、高血压、急性黄疸性肝炎、泌尿生殖系炎症、尿道炎、急性盆腔炎、阴道炎等肝经实火湿热疾病均有疗效。
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第一部分 龙胆泻肝汤各提取物的制备及抗白念珠菌活性的筛选
1 实验材料
1.1 菌株
白念珠菌标准株 SC5314 由第二军医大学药学院姜远英教授惠赠。15 株白念珠菌 VVC 临床分离株由合肥市第一人民医院妇产科陶瑞雪主任惠赠，科玛嘉培养基鉴定均为白念珠菌。
1.2 药物
批号 100314-201605 氟康唑标准品由合肥臻沃生物医药科技有限公司代购于中国食品药品检定研究院；龙胆泻肝汤复方中 10 味中药（龙胆草酒炒6g、黄芩炒9g、栀子酒炒9g、泽泻 9g、木通 6g、当归酒炒3g、生地黄酒炒6g、、柴胡 6g、生甘草 6g、车前子 6g）购于安徽中医药大学第一附属医院中药房，并经鉴定。
1.3 主要试剂
甲醇（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）、石油醚（60~90）（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）、氯仿（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）、乙酸乙酯（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）、正丁醇（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）。
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2 实验方法
2.1 龙胆泻肝汤的提取
将龙胆泻肝汤按 5 倍量 80%乙醇水溶液加热(70 ℃)冷凝回流 4 次，每次 3h，过滤，滤液合并，用旋转蒸发仪浓缩，有机溶剂用水分散，然后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别得到石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物，正丁醇提取物，并将各溶剂提取物用旋转蒸发仪浓缩，充分蒸干溶剂，最终得到相应的固体浓缩物。
2.2 菌悬液的配制
从 4℃保存的沙氏固体培养基上挑取白念珠菌 VVC 临床株单个菌落，接种至沙氏液体培养液中，37 ℃、200 r ·min-1培养 16 h，用血细胞计数板计数，再用 RPMI1640 培养液稀释至 2×106CFU/mL，备用。
2.3 白念珠菌 VVC 临床株 MIC 的测定
依据 CLSI 的 M27-A3 方案[21],先按二倍稀释法配制不同浓度提取物，使其终浓度为 2048、1024、512、256、128、64、32、16、8 g/mL，按每孔 100μL 加入96 孔板中，再加入 2.0×103CFU/mL 菌体的混悬液 100μL，37℃培养 48h，以肉眼观察无菌生长的最小药物稀释度作为各菌株的 MIC。同时设培养基空白对照和培养基加菌体（不含药物）的阴性对照（或称生长对照），实验重复 3 次，选取效果最好的溶剂萃取部位
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第三部分 龙胆泻肝汤氯仿提取物对白念珠菌侵袭力的作用研究...........23
1 实验材料.........23
1.1 菌株.....23
1.2 药物......23
1.3 主要试剂.......23
1.4 培养基的配制........23
1.5 实验仪器.......24
2 方法.........24
2.1 龙胆泻肝汤氯仿提取物对白念珠菌菌丝的影响.....24
2.2 龙胆泻肝汤氯仿提取物对白念珠菌各类水解酶的影响...........29
2.2.1 Sap、PL、Lip 水解酶阳性菌株的筛选..........29
2.2.2 龙胆泻肝汤氯仿提取物对水解酶阳性菌株..........30
2.2.3 龙胆泻肝汤氯仿提取物对水解酶阳性菌株相关基因表达水平的影响........30
3 结果........31
3.1 龙胆泻肝汤氯仿提取物对白念珠菌菌丝的影响.....31
3.2 龙胆泻肝汤氯仿提取物对白念珠菌各类水解酶的影响...........37
4 讨论.........43
5 小结.........43
4 讨论
4.1 龙胆泻肝汤氯仿提取对白念珠菌形态转化的影响
研究发现白念珠菌形成的菌丝在念珠菌感染过程中被认为是组织入侵的必要过程[39]，且无论在宿主上皮细胞诱导的胞吞作用还是主动穿入机制中均扮演着重要的角色[40]。我们推测龙胆泻肝汤氯仿提取对白念珠菌的二态性转换或菌体的活性可能具有一定的抑制作用。液体培养基实验和扫描电镜下白念珠菌的形态观察显示白念珠菌 256 μg/mL的 CELX 干预下，菌量显著减少且酵母-菌丝的二态性转换完全受到抑制。固体培养基菌落图显示，生长对照组菌落边缘出现肉眼可见的细密菌丝，且显微镜下菌落边缘致密的菌丝水平侵入琼脂培养基内；半固体培养基实验结果中对照组菌丝向下侵入培养基内。这二者的实验现象可一定程度上模拟浅表感染中白念珠菌对上皮细胞的侵袭能力[41]。在 CELX 干预下，随着用药剂量的增加，培养基内部菌丝长度逐渐缩短，用药量为 256 μg/mL 时菌丝完全被抑制。由液体培养基、扫描电镜图、固体培养基、半固体培养基的实验结果表明 CELX 对 VVC 临床菌株的形态学变化的抑制作用呈现出剂量依赖性，256 μg/mL 的 CELX 对其具有显著抑制作用。实验检测白念珠菌代谢活力，采用 FUN-1 荧光染料对其进行染色并在荧光显微镜下观察。实验中不仅可以观测到菌体形态，还可以通过荧光的颜色变化来判断菌体代谢活性变化。荧光显微镜法和 XTT 法实验结果提示在 CELX 的干预下菌丝延伸被抑制的同时菌体代谢活性降低。白念珠菌 CFU 计数实验提示 CELX 对白念珠菌的早期生长即可发挥抑制作用。#p#分页标题#e#
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结论
液体培养基实验和扫描电镜下白念珠菌的形态观察显示白念珠菌 256 μg/mL的 CELX 干预下，菌量显著减少且酵母-菌丝的二态性转换完全受到抑制。固体培养基菌落图显示，生长对照组菌落边缘出现肉眼可见的细密菌丝，且显微镜下菌落边缘致密的菌丝水平侵入琼脂培养基内；半固体培养基实验结果中对照组菌丝向下侵入培养基内。这二者的实验现象可一定程度上模拟浅表感染中白念珠菌对上皮细胞的侵袭能力[41]。在 CELX 干预下，随着用药剂量的增加，培养基内部菌丝长度逐渐缩短，用药量为 256 μg/mL 时菌丝完全被抑制。由液体培养基、扫描电镜图、固体培养基、半固体培养基的实验结果表明 CELX 对 VVC 临床菌株的形态学变化的抑制作用呈现出剂量依赖性，256 μg/mL 的 CELX 对其具有显著抑制作用。实验检测白念珠菌代谢活力，采用 FUN-1 荧光染料对其进行染色并在荧光显微镜下观察。实验中不仅可以观测到菌体形态，还可以通过荧光的颜色变化来判断菌体代谢活性变化。荧光显微镜法和 XTT 法实验结果提示在 CELX 的干预下菌丝延伸被抑制的同时菌体代谢活性降低。白念珠菌 CFU 计数实验提示 CELX 对白念珠菌的早期生长即可发挥抑制作用。
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参考文献（略）
