本文是一篇护理论文,护理论文是以护理科学及相关学科、边缘学科的理论为指导经过科研设计、实验、观察取得第一手资料再经归纳分析及必要的统计学处理而撰写成的护理科技文章或运用第二手资料经过综合、分析、整理而成的护理科技文章。 简言之护理论文是科技论文的一种是用来进行护理科学研究和描述研究成果的论说性文章。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇护理论文,供大家参考。
前 言
对成年和发育中的动物研究已经证明,酒精可以产生不同的效应,主要取决于:1)接触酒精的发育时期,2)酒精暴露模式(持续或者间歇),3)血液中酒精含量[34-37]。在中枢神经系统(CNS)中,大脑和小脑的板层样结构对酒精刺激极为敏感[5, 6]。胚胎和青春时期作为脑发育的关键时期,容易遭受到外界刺激的干扰而导致异常的脑发育,并最终影响其功能和行为。孕期接触高剂量酒精,可以引起胎儿酒精综合症(FAS)[7-9];青春期期间饮酒极大地增加了生活中患有酒精使用障碍的可能性[38],大剂量饮酒可以减少神经干细胞增殖抑制神经发生[39],同时在酒精使用障碍模型中已证实,酒精既能损害神经干细胞增殖也能降低新生神经元的存活[40]。放射状胶质细胞(RGCs)是一种重要的前体细胞[41]。在大脑中,位于海马齿状回(DG)颗粒下区(SGZ)的 RGCs 具有神经干细胞的特性,可以被神经干细胞生物标记物巢蛋白(Nestin)和 Sox2 标记[42]。也有研究表明,在正常培养条件下,海马的 RGCs可以表达一些干细胞/祖细胞基因并被 BLBP、GFAP、波形蛋白(Vomentin, VIM)、Nestin生物标记物标记[23];在黏附条件下,培养的海马 RGCs 也被证实具有星形胶质细胞和干细胞/祖细胞的属性[23]。在小脑中,伯格曼胶质细胞来源于 RGCs,可以为小脑颗粒细胞的迁移提供迁移支架以及调节伯格曼胶质细胞和颗粒细胞之间的相互作用[43]。伯格曼胶质细胞可以影响蒲肯野细胞的树突发育,其胶质细胞长纤维可以引导蒲肯野细胞的树突生长,进而影响树突棘的形成;随着小脑的发育,伯格曼胶质细胞纤维能够促进蒲肯野细胞的突触形成[27]。有文献证实,伯格曼胶质细胞与小脑皮质发生中的叶状结构和分层形成、颗粒细胞迁移、分子层中间神经元迁移与“归巢”等有关[26]。因此,伯格曼胶质细胞在小脑发育中扮演着重要角色。
在酒精暴露后的脑发育损伤中,我们拟采用催产素(OT)和白藜芦醇(RSV)进行处理,以期可以改善酒精暴露导致的脑发育损伤。OT 是一种哺乳动物激素,大部分由下丘脑视上核和室旁核合成。临床上主要用于妊娠末期,促进乳腺分泌乳汁、加强子宫收缩。随着科学研究的发展,现有研究发现催产素参与各种心理现象,包括奖励和记忆过程,可以作为一些精神疾病(包括成瘾、焦虑、自闭症和精神分裂症)的治疗药物[44]。同时,也有研究表明催产素可以促进雌鼠海马突触可塑性和认知功能,以及促进细胞增殖和成年海马神经发生[29]。在本课题中,我们选用青春期小鼠(4~5 周)以腹腔注射(Intraperitoneal injection,i.p)OT 进行处理,并通过灌胃(Intragastric,i.g)方式进行酒精建模,研究 OT 对酒精暴露后大脑发育的影响。具体内容如下:首先,应用免疫组织化学方法,通过观察能够整合入细胞 S 期(DNA合成期)可以作为增殖细胞标志物的 BrdU,研究 OT 对酒精暴露后大脑海马 DG 增殖细胞的影响;其次,γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是 CNS 中很重要的抑制性神经递质[45],而相关研究报道,酒精可以影响神经递质受体的相关功能。而 PV 是一种小清蛋白阳性的中间抑制性神经元标记物,其作用是以 GABA 为主要神经递质,抑制锥体神经元突触后兴奋传递。因此,在免疫组织化学实验中,我们采用 PV 标记含小清蛋白的中间抑制性神经元,研究 OT 对酒精暴露后大脑海马 DG 中含小清蛋白中间抑制性神经元的影响;最后,应用免疫组织化学方法,通过 Sox2(标记神经前体细胞的转录因子[46])和 GFAP(标记 RGCs 的放射状胶质纤维)共标标记大脑海马齿状回 RGCs,研究 OT 对酒精暴露后大脑海马齿状回 RGCs 的影响。
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第一部分 催产素对酒精暴露后青春期小鼠大脑发育的作用
催产素(OT)是一种激素,主要在下丘脑视上核和室旁核的大细胞内合成。除应用于临床分娩外,有研究报道,OT 在组织愈合中可作为一种免疫调节、抗炎剂使用[48],通过抗氧化、抗凋亡和抗炎作用来发挥其细胞保护作用[49-53];近年来研究报导,催产素可以促进细胞增殖和海马神经发生[29]。齿状回(DG)是海马兴奋传入和形成新记忆的部分[54, 55],也是其终生进行神经发生的部位[56]。放射状胶质细胞(RGCs)是一种分布于海马中的前体细胞,参与 DG 发育并对 DG 形态发生发挥关键作用[56]。近来研究显示,酒精暴露能严重影响海马的结构与功能[58-60]。大剂量饮酒可以减少神经干细胞增殖并抑制神经发生[39],在青春期过量饮酒会减少海马体积和干扰海马的学习和记忆功能[18, 61-64]。为了减轻酒精暴露后导致的大脑海马发育损伤,我们采用 OT 处理,以期可以改善酒精暴露后大脑发育的损伤作用。在本课题中,应用免疫组织化学方法,检测大脑海马 DG 区域的 BrdU(在脑中,标记有分裂能力的神经前体细胞)、PV(含 PV 的中间抑制性神经元,通常被认为是 GABA能神经元,在大脑皮层学习、记忆及信息传递中发挥重要作用)和 Sox2+GFAP(Sox2可以标记干细胞和具有干细胞性质的前体细胞;GFAP 可以标记星形胶质细胞,两者共标可以特异性标记 RGCs),来探明 OT 对酒精暴露后大脑发育损伤的影响。
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1.2 结 果
1.2.1 OT 促进酒精暴露后青春期小鼠大脑海马齿状回 SGZ 区域 BrdU 的表达
在本免疫组织化学实验研究中(如图 1-1 所示),采用 BrdU 标记青春期小鼠大脑海马齿状回 SGZ 区域的增殖细胞,观察到催产素组大脑海马齿状回 SGZ 区域 BrdU 的阳性细胞数量较对照组增加,但无统计学差异。酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区域 BrdU的阳性细胞数量较对照组减少(P<0.05)。催产素+酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区域BrdU 的阳性细胞数量较酒精组增加(P<0.05)。采用 PV 标记青春期小鼠大脑海马齿状回 SGZ 区域 PV 阳性中间抑制性神经元。在本实验的免疫组织化学结果中(如图1-2所示)可以观察到催产素组大脑海马齿状回SGZ区域 PV 的阳性细胞数量较对照组增加,但无统计学差异。酒精组大脑海马齿状回 SGZ区域 PV 的阳性细胞数量较对照组减少(P<0.05)。催产素+酒精组大脑海马齿状回 SGZ区域 PV 的阳性细胞数量较酒精组增加(P<0.05)。
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第二部分 白藜芦醇对酒精暴露后新生期小鼠小脑发育的作用 ............23
2.1 材料与方法.... 23
2.2 结 果........ 30
2.3 讨 论........ 34
2.4 小 结........ 35
2.4 小 结
2.4.1 应用免疫组织化学方法,采用 CBD-28K 标记新生小鼠小脑蒲肯野细胞,与对照组相比较,酒精组 CBD-28K 标记的阳性细胞胞体数及树突棘长度减少(缩短);与酒精组相比较,白藜芦醇+酒精组 CBD-28K 标记的阳性细胞胞体数及树突棘长度增加(增长),这提示 RSV 对酒精暴露致新生期小鼠小脑蒲肯野细胞损伤有保护作用。
2.4.2 应用免疫组织化学方法,采用 BLBP 和 GFAP 分别标记新生期小鼠小脑伯格曼胶质细胞胶质纤维,与对照组相比较,酒精组 BLBP 和 GFAP 标记的阳性细胞胶质纤维数减少;与酒精组相比较,白藜芦醇+酒精组 BLBP 和 GFAP 标记的阳性细胞胶质纤维数增加,这提示RSV对酒精暴露致新生期小鼠小脑伯格曼胶质细胞损伤有保护作用。
2.4.3 应用免疫组织化学方法,采用 Iba1 标记新生期小鼠小脑小胶质细胞,与对照组相比较,酒精组 Iba1 标记的阳性细胞数量增加;与酒精组相比较,白藜芦醇+酒精组Iba1 标记的阳性细胞数量减少,这提示 RSV 对酒精暴露致新生期小鼠小脑小胶质细胞激活有抑制作用,进而减少炎症介质释放,减轻酒精毒性作用。
2.4.4 应用 WB 检测新生期小鼠小脑内 NF-κB 表达水平,与对照组相比较,酒精组NF-κB 表达水平增加;与酒精组比较,白藜芦醇+酒精组 NF-κB 表达水平下降,进而来降低酒精暴露对新生期小鼠小脑发育的损伤作用。
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总结
1. OT 与酒精暴露后青春期小鼠大脑海马齿状回的增殖细胞有关。应用免疫组织化学方法,采用 BrdU 标记海马齿状回的增殖细胞,发现与对照组相比较,酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区 BrdU 表达量减少;而与酒精组相比较,催产素+酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区 BrdU 表达量增加,提示 OT 可以使酒精暴露后海马齿状回 SGZ 区域增殖细胞数量增加。#p#分页标题#e#
2. OT 与酒精暴露后青春期小鼠大脑海马齿状回的 PV 阳性中间抑制性神经元有关。应用免疫组织化学方法,采用 PV 标记海马齿状回的 PV 阳性的中间抑制性神经元,发现与对照组相比较,酒精组大脑海马齿状回SGZ区PV表达量减少;而与酒精组相比较,催产素+酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区 PV 表达量增加,提示 OT 可以使酒精暴露后海马齿状回 SGZ 区域 PV 中间抑制性神经元数量增加。
3. OT 与酒精暴露后青春期小鼠大脑海马齿状回的 RGCs 发育有关。应用免疫组织化学方法,采用 Sox2+GFAP 荧光共标对 RGCs 进行标记,发现与对照组相比较,酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区 Sox2+GFAP 荧光共标的 RGCs 数量减少;与酒精组相比较,催产素+酒精组大脑海马齿状回 SGZ 区 Sox2+GFAP 荧光共标的 RGCs 数量增加,提示OT 可使酒精暴露后海马齿状回 SGZ 区域 Sox2+GFAP 荧光共标的 RGCs 数量增加。
4. RSV 对酒精暴露致新生期小鼠小脑发育损伤的保护作用。应用免疫组织化学方法,采用 CBD-28K 标记新生期小鼠小脑蒲肯野细胞,与对照组相比较,酒精组 CBD-28K 标记的阳性细胞胞体数及树突棘长度减少(缩短);与酒精组相比较,白藜芦醇+酒精组CBD-28K 标记的阳性细胞胞体数及树突棘长度增加(增长)。
5. RSV 对酒精暴露致新生期小鼠小脑发育损伤的保护作用。应用免疫组织化学方法,采用 BLBP 和 GFAP 分别标记新生期小鼠小脑伯格曼胶质细胞胶质纤维,与对照组相比较,酒精组 BLBP 和 GFAP 标记的阳性细胞胶质纤维数减少;与酒精组相比较,白藜芦醇+酒精组 BLBP 和 GFAP 标记的阳性细胞胶质纤维数增加。
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参考文献(略)